雙色熒光示蹤肝癌模型的特性分析及miR-146b-5p影響肝癌細(xì)胞增殖、遷移能力的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、第一部分雙色熒光示蹤肝癌模型的特性分析
　　目的：建立紅、綠雙色熒光示蹤肝癌動(dòng)物模型并對(duì)其腫瘤生物學(xué)特性進(jìn)行分析。
　　方法：采用直接注射法將帶有紅色熒光的肝癌細(xì)胞接種于綠色熒光裸鼠肝葉內(nèi)，建立紅、綠雙色熒光示蹤肝癌動(dòng)物模型。小動(dòng)物活體熒光成像儀實(shí)時(shí)觀察肝癌的生長(zhǎng)轉(zhuǎn)移情況。處死荷瘤鼠，對(duì)其進(jìn)行大體解剖。取移植瘤做冰凍切片，顯微鏡下觀察移植瘤的組織結(jié)構(gòu)特征。同時(shí)取移植瘤和腹水原代培養(yǎng)，移植瘤做免疫組織化學(xué)染色，分析腫瘤相關(guān)蛋白

2、表達(dá)。
　　結(jié)果：成功建立了雙色熒光示蹤肝癌動(dòng)物模型。本模型可以模擬出肝癌侵襲、轉(zhuǎn)移、癌性腹水等肝癌生物學(xué)特征。熒光成像可檢測(cè)到腫瘤的生長(zhǎng)及轉(zhuǎn)移。冰凍切片可觀察到肝癌組織的構(gòu)建過程，肝癌細(xì)胞與宿主細(xì)胞的融合現(xiàn)象也清晰可見。免疫組化結(jié)果顯示腫瘤相關(guān)蛋白PDGFRɑ、pSTAT3、IRAK1、MMP9、N-RAS在肝癌組織中表達(dá)。
　　結(jié)論：本方法建立的雙色熒光示蹤肝癌動(dòng)物模型穩(wěn)定可靠、易重復(fù)。該模型可直接觀察到腫瘤組織重建過程

3、中肝癌細(xì)胞與宿主細(xì)胞間的相互作用，進(jìn)一步闡明了腫瘤微環(huán)境在肝癌發(fā)生發(fā)展中的作用。
　　第二部分 miR-146b-5p影響肝癌細(xì)胞增殖、遷移能力的實(shí)驗(yàn)研究
　　目的：檢測(cè)miR-146b-5p在肝癌細(xì)胞中的表達(dá)情況，研究其對(duì)肝癌細(xì)胞增殖、遷移能力的影響并初步探討其發(fā)揮作用的機(jī)制。
　　方法：Real-time RT-PCR方法檢測(cè)肝癌細(xì)胞和正常肝細(xì)胞中miR-146b-5p的表達(dá)水平。通過CCK-8實(shí)驗(yàn)、平板克隆形成實(shí)

4、驗(yàn)、Transwell遷移實(shí)驗(yàn)、劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)觀察過表達(dá)miR-146b-5p對(duì)肝癌細(xì)胞的增殖、遷移能力的影響。應(yīng)用生物學(xué)信息軟件預(yù)測(cè)miR-146b-5p可能作用的靶基因，并用Western blot方法進(jìn)行靶基因驗(yàn)證。
　　結(jié)果：miR-146b-5p在肝癌細(xì)胞中較正常肝細(xì)胞出現(xiàn)低表達(dá)，轉(zhuǎn)染miR-146b-5p mimics后的肝癌細(xì)胞增殖、遷移能力下降，Western blot結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染miR-146b-5p mimics