魔芋ACE抑制肽分離純化及體外降血壓活性研究.pdf

1、ACE抑制肽（Angiotensin Converting Enzyme Inhibitory Peptides）是一種對(duì)ACE活性具有抑制作用的多肽類物質(zhì)。ACE抑制肽通過競(jìng)爭(zhēng)性的與ACE發(fā)生結(jié)合，能夠阻斷具有升血壓活性的血管緊張素II生成，促進(jìn)具有降血壓活性的舒緩肽和腦啡肽生成，從而起到降血壓作用。ACE抑制肽具有分子量小、生物利用度高、對(duì)人體無過敏性等特點(diǎn)。目前，ACE抑制肽的來源和制備方法已經(jīng)成為國(guó)內(nèi)外研究的熱點(diǎn)之一。
　

2、　據(jù)報(bào)道，我國(guó)魔芋精粉年產(chǎn)量已超過5000噸，在魔芋精粉加工過程中會(huì)產(chǎn)生重量輕、顆粒小的粉末，稱為魔芋飛粉，約為精粉產(chǎn)量的30％～40%。魔芋飛粉大多被直接廢棄掉，只有極少一部分被利用。研究表明，魔芋飛粉中含有豐富的蛋白質(zhì)，直接酶解魔芋蛋白質(zhì)可獲得ACE抑制肽。因此，魔芋飛粉有可能是一種制備ACE抑制肽的天然藥物新資源。
　　本文以魔芋飛粉為原料，采用堿溶酸沉法提取魔芋蛋白質(zhì)，直接酶解魔芋蛋白質(zhì)制備ACE抑制肽。采用超濾法、Sep

3、hadex G-15柱層析及反相高效液相色譜法（RP-HPLC）對(duì)酶解液進(jìn)行分離純化，得到了純度較高的魔芋ACE抑制肽，并且對(duì)其進(jìn)行體外降血壓活性檢測(cè)及結(jié)構(gòu)分析。研究?jī)?nèi)容及結(jié)果主要有：
　?。?）采用堿溶酸沉法提取魔芋蛋白質(zhì)。以ACE抑制率和水解度為考察指標(biāo)，利用菠蘿蛋白酶、堿性蛋白酶、復(fù)合蛋白酶、風(fēng)味蛋白酶、膠原蛋白酶酶解魔芋蛋白制備ACE抑制肽。通過單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)優(yōu)化魔芋ACE抑制肽的酶解工藝條件。結(jié)果表明：最佳水解用酶

4、為堿性蛋白酶。在設(shè)定的酶解條件下，酶解pH值對(duì)ACE抑制率影響顯著，酶解溫度、底物濃度、酶用量對(duì)其影響不顯著。得出魔芋ACE抑制肽的最佳酶解工藝條件為：酶解pH為10、底物濃度為3%、酶解溫度為46℃、酶用量5000U/g、酶解時(shí)間3h，酶解液的ACE抑制率為82.02%。
　　（2）魔芋ACE抑制肽分離純化。以膜通量和ACE抑制率為考察指標(biāo)，采用規(guī)格為10、5、1KDa的超濾膜進(jìn)行超濾法分離，結(jié)果1KDa的超濾膜對(duì)魔芋ACE抑制

5、肽的分離效果最好。對(duì)分離條件進(jìn)行優(yōu)化，得到最佳分離條件為：料液pH為9、超濾壓力為0.07MPa、超濾時(shí)間為15min，分離后所得粗品的ACE抑制率為85.30%，膜通量為38L/m2·h。
　　以ACE抑制率為考察指標(biāo)，采用Sephadex G-15柱層析對(duì)超濾后的魔芋ACE抑制肽粗品進(jìn)行分離，確定出Sephadex G-15柱層析的最佳分離條件為：樣品濃度為120mg/mL、流速為0.8mL/min、上樣量為1.0mL，分離后

6、組分的ACE抑制率為90.20%。
　　采用反相高效液相色譜法對(duì)Sephadex G-15柱層析分離后的組分進(jìn)行純化，得到峰Ⅰ和峰Ⅱ處兩個(gè)組分，峰Ⅰ處組分的ACE抑制率為24.35%，峰Ⅱ處組分的ACE抑制率為92.85%。采用紫外分光光度法測(cè)得純化后樣品中魔芋ACE抑制肽的含量為77.20%。
　?。?）魔芋ACE抑制肽結(jié)構(gòu)分析。運(yùn)用氨基酸分析儀從魔芋ACE抑制肽中檢測(cè)出了16種氨基酸，其中精氨酸、谷氨酸、天門冬氨酸含量較

7、高。采用紫外全波長(zhǎng)掃描確定魔芋 ACE抑制肽的最大吸收波長(zhǎng)為218.0nm，與ACE抑制肽標(biāo)準(zhǔn)品的紫外掃描結(jié)果一致。采用紅外光譜掃描對(duì)魔芋ACE抑制肽樣品進(jìn)行分析檢測(cè)，結(jié)果表明：樣品及ACE抑制肽標(biāo)準(zhǔn)品所表現(xiàn)出的紅外光譜特征基本一致，其結(jié)構(gòu)中均存在酰胺鍵、C-C、C-H、O-H、C-N、C=O等基團(tuán)。采用凝膠滲透色譜法對(duì)魔芋ACE抑制肽的分子量及分子量分布進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果表明其峰值分子量分別為262Da、634Da，其分子量分布范圍為：2