靶向COX-2shRNA對大鼠肝星狀細胞α-SMA、Ⅰ型膠原、TGF-β1基因表達的影響.pdf

1、目的:
　　研究COX-2shRNA對大鼠肝星狀細胞COX-2、α-SMA、Ⅰ型膠原、TGF-β1基因表達的調(diào)控作用。
　　方法:
　　(1)應(yīng)用Lipofectamine2000將三條不同的COX-2shRNA轉(zhuǎn)染到大鼠肝星狀細胞,熒光顯微鏡觀察其轉(zhuǎn)染效率,RT-PCR及western blot驗證真核表達載體。
　　(2)RT-PCR技術(shù)分別在轉(zhuǎn)染后24小時、48小時、72小時檢測COX-2shRNA和尼美舒

2、利對COX-2、α-SMA、Ⅰ型膠原、TGF-β1 mRNA表達的影響。
　　結(jié)果:
　　(1)熒光顯微鏡顯示:COX-2shRNA成功轉(zhuǎn)染入大鼠肝星狀細胞后,熒光顯微鏡下細胞中的細胞質(zhì)可見綠色的熒光,COX-2shRNA-1、COX-2shRNA-2、COX-2shRNA-3的轉(zhuǎn)染效率均可達70％以上。
　　(2)COX-2shRNA沉默效應(yīng):RT-PCR顯示三條COX-2shRNA在轉(zhuǎn)染48小時后均能抑制大鼠肝星狀

3、細胞 COX-2 mRNA的表達（p<0.05),以COX-2shRNA-1的抑制效果最佳。western blot顯示COX-2shRNA-1在轉(zhuǎn)染48小時后能抑制COX-2蛋白的表達。
　　(3)不同處理方式對大鼠肝星狀細胞COX-2表達的影響:在轉(zhuǎn)染24小時后,COX-2shRNA-1及尼美舒利組中COX-2mRNA的表達低于空白對照組和空載體組(p<0.05);在轉(zhuǎn)染48小時及72小時后,三條質(zhì)粒組及尼美舒利組中COX-2

4、mRNA的表達低于空白對照組和空載體組（p<0.05),其中以COX-2shRNA-1在轉(zhuǎn)染后72小時最明顯。
　　(4)不同處理方式對大鼠肝星狀細胞α-SMA表達的影響:在轉(zhuǎn)染后24小時,各組α-SMAmRNA的表達均無統(tǒng)計學(xué)差異;轉(zhuǎn)染后48小時COX-2shRNA-1、COX-2shRNA-2及尼美舒利組α-SMAmRNA表達低于空白對照組和空載體組(p<0.05);轉(zhuǎn)染后72小時三條質(zhì)粒及尼美舒利組α-SMAmRNA的表達均

5、低于空白對照組和空載體組(p<0.05),其中以COX-2shRNA-1在轉(zhuǎn)染后72小時最明顯。
　　(5)不同處理方式對大鼠肝星狀細胞Ⅰ型膠原表達的影響:在轉(zhuǎn)染后24小時、48小時、72小時 COX-2shRNA-1及尼美舒利組Ⅰ型膠原mRNA的表達均低于空白對照組和空載體組(p<0.05),其中以COX-2shRNA-1在轉(zhuǎn)然后72小時最明顯。
　　(6)不同處理方式對大鼠肝星狀細胞TGF-β1表達的影響:轉(zhuǎn)然后24小時