抑食海金藻(Aureococcus anophagefferens)的氮、磷營養(yǎng)生理與分子檢測技術(shù)研究.pdf

1、近年,我國秦皇島沿岸海域接連發(fā)生褐潮,引發(fā)褐潮的關(guān)鍵物種為抑食海金藻。本實驗的研究對象為抑食海金藻,由于抑食海金藻體積微小,在光學顯微鏡下,難以從環(huán)境中識別出來。本實驗主要針對氮磷營養(yǎng)鹽對抑食海金藻生理生長的研究及海水中抑食海金藻的檢測。目前,人為因素和自然因素導致大量的氮磷營養(yǎng)鹽流入海洋環(huán)境中,致使海洋沿岸水體富營養(yǎng)化。水體營養(yǎng)鹽過剩使抑食海金藻大量繁殖,由此引發(fā)褐潮形成。
　　在18℃、22℃條件下對抑食海金藻進行純培養(yǎng),我們

2、通過固定不同P的起始濃度,改變N的加入量來控制不同的N/P。經(jīng)過22天的培養(yǎng),在光學顯微鏡下記錄抑食海金藻的生長數(shù)量,從而得出抑食海金藻的最適生長條件。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn):
　　(1)在營養(yǎng)鹽濃度相同的條件下,在一定溫度范圍內(nèi),抑食海金藻的生長速度和最大比生長率隨著溫度的升高而加快。
　　(2)在同一溫度、同一P的起始濃度培養(yǎng)條件下,抑食海金藻的生長速度和最大比生長率隨著N/P濃度的增加而先升高后降低。
　　(3)在同一溫度、

3、同一N/P的培養(yǎng)條件下,抑食海金藻的生長速度和最大比生長率隨著P起始濃度的增加而先升高后降低。
　　(4)N,P,溫度過高或過低都對抑食海金藻的生長繁殖有限制作用,并且在不同的條件下,抑食海金藻的生長繁殖都有一個最適生長范圍。
　　通過對秦皇島沿岸東山浴場、老虎石浴場和養(yǎng)殖區(qū)采集22個站位水樣進行分析,建立了檢測海水中抑食海金藻濃度的方法。本實驗利用熒光定量PCR和葉綠素a的測定方法檢測環(huán)境樣品中抑食海金藻的濃度。并將計數(shù)、

4、熒光定量PCR和葉綠素a三種方法所反映抑食海金藻的濃度建立起相關(guān)性。其結(jié)果發(fā)現(xiàn):計數(shù)只適合實驗室純培養(yǎng),用于檢測熒光定量PCR和葉綠素a兩種方法的準確性;葉綠素a的方法只能用于褐潮發(fā)生時期檢測海水中抑食海金藻的濃度,不能應用于前期的預防;熒光定量PCR可用于褐潮發(fā)生的任何時期及其前期的預防。
　　通過對秦皇島22個站位的水樣分析發(fā)現(xiàn),在2013年8月,東山浴場和老虎石浴場發(fā)生三級褐潮(>200,000 cells ml-1),在秦

5、皇島沿岸的養(yǎng)殖區(qū),4個站位發(fā)生三級褐潮,6個站位發(fā)生二級褐潮(35,000–200,000 cells ml-1);所有的10月份采集的養(yǎng)殖區(qū)站位都發(fā)生一級褐潮(>0 to≤35,000 cells ml-1)。用測葉綠素a的方法來檢測環(huán)境樣品中抑食海金藻的含量,其結(jié)果與熒光定量PCR的檢測方法所檢測出的結(jié)果有所不同,其原因是葉綠素a的方法所測出的結(jié)果反映的是海水中所有微藻的生物量,并非單單是一種藻的濃度,只有當褐潮發(fā)生時,海水中抑食海