腫瘤抗原cml28hlaa39;0201限制性ctl表位的鑒定39;

1、第三軍醫(yī)大學碩士學位論文腫瘤抗原CML28HLA-A0201限制性CTL表位的鑒定姓名：韓俊峰申請學位級別：碩士專業(yè)：免疫學指導教師：吳玉章20040501第三軍醫(yī)大學碩士學位論文 7 同患者之間 不同組織來源的腫瘤組織間表達具有差異 而且在同一患者同一類型腫瘤發(fā)展的不同時期的表達也有明顯的差異 因此 鑒定盡可能多 CT 抗原的 CTL 表位對于臨床上惡性腫瘤的免疫學治療具有重要的意義慢性白血病腫瘤抗原 CML28 是由 Xiao- F

2、eng Yang 等利用 SEREX cDNA 表達文庫血清分析 方法鑒定的一種新的 CT 抗原 研究證實 該腫瘤抗原不僅在慢性白血病等血液系統(tǒng)惡性腫瘤中高表達 而且在多種上皮來源的實體腫瘤中也有高水平的表達 而在睪丸外的正常組織中則未檢測到表達 鑒于 HLA-A*0201 是中國人群中最為常見的 HLA 類分子的型別 陽性率高達 50% 而且也是北美高加索人種中最常見的HLA 類分子的型別 其陽性率高達 98% 因此 如果腫瘤抗原

3、CML28 的 HLA- A*0201限制的 CTL 表位被鑒定 將會對于中國人群中和北美高加索人群中 C M L 2 8 表達陽性的腫瘤的免疫治療 具有十分重要的作用在本實驗中 我們致力于鑒定 CML28 的 HLA- A*0201 限制性 CTL 表位 首先我們采用超基序和量化基序相結合對慢性白血病腫瘤抗原 CML28 的 HLA-A2 限制性表位進行預測 先采用超基序法對所有可能成為 CML28 抗原的 HLA-A2 型 CTL

4、表位的九肽篩選 發(fā)現(xiàn)符合條件的九肽序列共有 45 條 然后利用量化基序?qū)γ總€位點的結合力進行量化 應用九肽結合矩陣對 45 個表位進行計算和排序 發(fā)現(xiàn)符合條件的肽共有 15 條 我們從中選出親和力最高的四條肽 ALFCGVACA?ALVDAGVPMALDSDGTLV SLLACCLNA 合成純化鑒定 其次 采用表達 HLA-A2 分子的 T2檢測候選肽與 HLA-A2 分子的結合情況 候選肽 ALVDAGVPM 和 ALDSDGTLV

5、的親和力較高 FI 值分別是 1.17 1.17 ALFCGVACA 和 SLLACCLNA 僅有低度親和力FI 值分別是 0.49 0.96 最后 采用靈敏度高的 ELISPOT 和 51Cr 釋放法檢測抗原肽體外刺激HLA- A2 陽性的健康人PBMC 所產(chǎn)生的抗原肽特異性的 T細胞分泌的細胞因子和溶解活性 結果顯示 ALVDAGVPM 173- 181 刺激 PBMC 所產(chǎn)生的 T 細胞能特異性的殺傷 HLA-A2 和 CML28