現(xiàn)代醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)學(xué)_骨髓細(xì)胞微核實(shí)驗(yàn)

1、骨髓細(xì)胞微核實(shí)驗(yàn),,微核試驗(yàn)是用于染色體損傷和干擾細(xì)胞有絲分裂的化學(xué)毒物的快速檢測(cè)方法。微核(Micronucleus,MCN)是指細(xì)胞中主核之外的顆粒，染色與細(xì)胞核一致，相當(dāng)于細(xì)胞直徑的1/20-1/5，呈圓形或杏仁狀。是細(xì)胞內(nèi)染色體斷裂或紡錘絲受影響而在細(xì)胞有絲分裂時(shí)滯留在細(xì)胞核外的遺傳物質(zhì)。,實(shí)驗(yàn)原理,the mechanism of micronucleus formation in the PCEs and NCEs,PCE

2、：polychromatic erythrocytes；NCE：normochromatic erythrocytes,機(jī)理：1 有絲分裂毒物的作用使個(gè)別染色體或帶著絲點(diǎn)的染色體環(huán)和斷片在細(xì)胞分裂后期被滯留在細(xì)胞質(zhì)中2 斷片或無(wú)著絲點(diǎn)染色體在細(xì)胞分裂后期不能定向移動(dòng)，從而遺留在細(xì)胞質(zhì)中結(jié)論： 微核試驗(yàn)?zāi)軝z測(cè)化學(xué)或其他物質(zhì)因素誘導(dǎo)產(chǎn)生的染色體完整性改變和染色體分離改變。,實(shí)驗(yàn)原理,,無(wú)核細(xì)胞,,,紅細(xì)胞,有核細(xì)胞

3、中微核難與正常核分葉及核突出物區(qū)別,微核實(shí)驗(yàn),紅細(xì)胞的分化成熟過(guò)程,,小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核的形成,9,環(huán)磷酰胺（CTX）,,最常用的烷化劑類(lèi)抗腫瘤藥。在體外無(wú)抗腫瘤活性，進(jìn)入體內(nèi)經(jīng)轉(zhuǎn)化、分解，生成酰胺氮芥對(duì)腫瘤細(xì)胞有細(xì)胞毒作用。副作用明顯，有惡心、食欲減退、脫發(fā)、白細(xì)胞減少、中毒性膀胱炎、肝功能損傷等。具有顯著的遺傳、生殖毒性：停經(jīng)或精子缺乏，妊娠初期時(shí)給予可致畸胎。 用藥后24-30小時(shí)，骨髓中微核形成達(dá)

4、峰。,10,結(jié)果,示小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞中一個(gè)微核,示小鼠骨髓正常嗜多染紅細(xì)胞,11,示小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞中兩個(gè)微核,12,示小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞中多個(gè)微核,Giemsa染色,PCE胞質(zhì)內(nèi)含有核糖體，染色呈灰藍(lán)色；MCN多數(shù)為圓形，嗜色性與核質(zhì)一致，呈紫紅色或藍(lán)紫色NCE的核糖體已消失，被染成淡桔紅色。,實(shí)驗(yàn)?zāi)康?用化療藥（環(huán)磷酰胺）制備突變模型觀察小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞（PCE）微核,【Animal】 小鼠是微核試驗(yàn)的常規(guī)

5、動(dòng)物，通常用7～12周齡，體重18～20g的小鼠?！綬eagents 】 小牛血清 Giemsa染液 環(huán)磷酰胺,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及試劑,實(shí)驗(yàn)分組和染毒方法,染毒方法（30h兩次給藥法）：兩次給受試物間隔24h，第二次給藥后6h取材,,,處死：小鼠頸椎脫臼處死；,,取股骨：防止出血；,,,,,,,取骨髓：小牛血清1滴,推片：30度角；,晾干：一

6、定要干；,固定：甲醇固定10min, 需要晾干；,染色：Gimesa染液染色（10~15min）,沖洗：蒸餾水沖洗，晾干,,閱片: 觀察微核。,染毒后操 作步驟,推 片 方 法,,觀察與計(jì)數(shù)：低倍鏡下選擇分布均勻，染色較好的區(qū)域 油鏡下觀察計(jì)數(shù)多染紅細(xì)胞（PCE）呈灰藍(lán)色，正染紅細(xì)胞（NCE）呈橘黃色。典型的微核多為單個(gè)、圓形、邊緣光滑整齊，嗜色性與核質(zhì)一致，呈紫紅色或藍(lán)紫色 。計(jì)數(shù)1000個(gè)PCE中含