hplc_elsd法測(cè)定化學(xué)藥物成鹽離子含量準(zhǔn)確性的影響因素探討

1、★技術(shù)探討★HPLC－ELSD法測(cè)定化學(xué)藥物成鹽離子含量準(zhǔn)確性的影響因素探討李婭萍，常艷，姚尚辰，胡昌勤＊＊(中國(guó)食品藥品檢定研究院，北京100050)摘要目的:探討用混合模式離子交換柱建立HPLC－ELSD法測(cè)定化學(xué)藥物成鹽離子含量準(zhǔn)確性的影響因素。方法:采用新型混合模式離子交換柱AcclaimTrinityP1(3.0mm100mm，5μm)，以30mmolL－1醋酸銨緩沖液(取醋酸銨4.59g，加水1900mL使溶解，用冰醋酸調(diào)節(jié)

2、pH至5.2，加入乙腈100mL)－乙腈(50∶50，vv)為流動(dòng)相，流速0.3mLmin－1，柱溫25℃以蒸發(fā)光散射檢測(cè)器檢測(cè)，漂移管溫度90℃，氮?dú)庾鳛檩d氣，流速2.6Lmin－1。建立HPLC－ELSD法測(cè)定奧美拉唑鈉中鈉離子含量并進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證同時(shí)選擇奧美拉唑鈉、頭孢曲松鈉、鹽酸博寧霉素，分別代表藥物分子在色譜過(guò)程中不保留、強(qiáng)保留和不洗脫3種狀態(tài)，進(jìn)行準(zhǔn)確度、精密度試驗(yàn)，以數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)軟件SPSS19.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，考察藥物分子洗

3、脫狀態(tài)對(duì)成鹽離子含量準(zhǔn)確性(準(zhǔn)確度、精密度)的影響。結(jié)果:鈉離子濃度在1.94～77.48μgmL－1范圍內(nèi)與峰面積呈二項(xiàng)式相關(guān)關(guān)系(r=0.9999)加樣回收率(n=3)分別為104.5%、101.7%、102.6%，ＲSD分別為1.3%、3.7%、2.2%奧美拉唑鈉中鈉離子平均含量(n=8)為6.23%，與理論鈉離子含量(6.24%)無(wú)顯著性差異(t－檢驗(yàn)，α=0.05)藥物分子洗脫狀態(tài)對(duì)鈉離子測(cè)定的中間精密度、重復(fù)性結(jié)果以及氯離子

4、測(cè)定的重復(fù)性有影響(ANOVA分析，α=0.05)，藥物分子很難洗脫以及不洗脫將導(dǎo)致精密度偏低。結(jié)論:采用新型混合模式離子交換柱，用HPLC－ELSD法測(cè)定化學(xué)藥物中成鹽離子含量時(shí)，方法通用性好，專屬性強(qiáng)，線性范圍寬，耐用性好，但藥物分子很難洗脫或者不洗脫在色譜填料上將導(dǎo)致精密度偏低。關(guān)鍵詞:奧美拉唑鈉成鹽離子含量高效液相色譜－蒸發(fā)光散射檢測(cè)準(zhǔn)確性影響因素中圖分類號(hào):Ｒ917文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A文章編號(hào):0254－1793(2014)09－1

5、660－07InvestigationoffactsaffectingthereliabilityofHPLC－ELSDmethodincontentdeterminationofsalt－fmingionsinchemicalactivepharmaceuticalingredientsLIYa－ping，CHANGYan，YAOShan－chen，HUChang－qin＊＊(NationalInstitutesofFoodDrugC

6、ontrol，Beijing100050，China)AbstractObjective:ToinvestigatethefactsaffectingthereliabilityofHPLC－ELSDmethodincontentdeterminationofsalt－fmingionsinchemicalactivepharmaceuticalingredientsMethods:Thecontentofsodiuminomepraz

7、olesodiumchemicalreferencestardwasanalyzedusinganewHPLC－ELSDmethodTheHPLCsystemwasequippedwithanewtypeofmixed－modeionexchangecolumnAcclaimTrinityP1(3.0mm100mm，5μm)anELSDdetectusingamixtureof30mmolL－1ammoniumacetatebuffer

8、(4.59gofammoniumacetatedissolvedin1900mLofwaterpHwasadjustedto5.2withglacialaceticacidsupplementedwith100mLofacetonitrile)－acetonitrile(50∶50，vv)asmobilephasetheflowratewas0.3mLmin－1Thecolumntemperaturewas25℃Thetemperatu

9、reofdrifttubeintheevapatinglightscatteringdetectwas90℃Nitrogengaswasusedascarriergastheflowratewas2.6LperminuteTheHPLC－ELSDmethodwasvalidatedadequatelyThreetypicalchemicalactivepharmaceuticalingredientsieomeprazolesodium

10、，ceftrixonesodiumboningmycinhydrochlideweregroupedintothreetypicalelutionstatusofunreserved，verystronglyreservedunabletoeluteThedataofprecisionaccuracyfrommethodvali十二五國(guó)家科技支撐計(jì)劃“新型分離材料研發(fā)與集成示范“(No2012BAK25B02)資助＊＊通訊作者Tel:(

11、010)67095308E－mail:hucq@nifdcgcn第一作者Tel:13520969577E－mail:liyaping@nifdcgcn藥物分析雜志ChinJPharmAnal2014，34(9)—1662—3000型液相色譜系統(tǒng)(包括雙三元輸液泵系統(tǒng)紫外檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)254nmAlltech蒸發(fā)光散射檢測(cè)器帶溫控的自動(dòng)進(jìn)樣器，進(jìn)樣器溫度為4℃數(shù)23供試品溶液的制備取樣品細(xì)粉約12.5mg，精密稱定，置25mL量瓶中，用

12、50%乙腈水溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，過(guò)濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液(濃度為0.5mgmL－1)。據(jù)處理軟件為ChromLeon)，美國(guó)Dionex公司。Milli－Q超純水系統(tǒng)，法國(guó)Millipe公司。色譜條件與測(cè)定法色譜條件:Ⅰ號(hào)和Ⅱ號(hào)色譜柱均為混合模式色譜柱AcclaimTrinityP1(3.0mm100mm，5μm，購(gòu)自美國(guó)Dionex公司)，但批號(hào)不同，Ⅰ號(hào)色譜柱主要用于方法開發(fā)以及大部分方法學(xué)驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，批號(hào)為L(zhǎng)otNo.0

13、06－04－062，Ⅱ號(hào)色譜柱用于中間精密度、耐用性研究以及樣品測(cè)定，批號(hào)為L(zhǎng)otNo.006－24試劑與試藥待測(cè)樣品為奧美拉唑鈉待標(biāo)定化學(xué)對(duì)照品1批(批號(hào)100760－201202)，由中國(guó)食品藥品檢定研究院提供。氯化鈉工作基準(zhǔn)品(氯化鈉，工作基準(zhǔn)品級(jí)別，含量99.95%～100.05%，以100.0%計(jì)，批號(hào)20000318，由北京益利精細(xì)化學(xué)品有限公司提供)醋酸銨(CH3COONH4，AＲ級(jí)別，含量≥99.5%，批號(hào)2008012

14、6，由國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司提供)氯1.204－031以30mmolL醋酸銨緩沖液(取醋酸銨4.59g，加水1900mL使溶解，用冰醋酸調(diào)節(jié)pH至5.21，加入乙腈100mL)－乙腈(50∶50，vv)為流動(dòng)相，流速為0.3mLmin－1柱溫25℃以Alltech蒸發(fā)光散射檢測(cè)器檢測(cè)，漂移管溫度90℃，氮?dú)庾鳛檩d氣，流速為2.6Lmin－1。系統(tǒng)適用性試驗(yàn):取氯化鈉對(duì)照品溶液，注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)流動(dòng)相中有機(jī)相比例，使鈉離子主峰－1(

15、KCl，AＲ級(jí)別，含量≥99.5%，批號(hào)化鉀F20100713，由國(guó)家集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司提供)硫酸鋰(Li2SO4H2O，AＲ級(jí)別，含量≥99.0%，批號(hào)20060405，由天津市祿晨化學(xué)試劑廠提供)無(wú)水氯化鈣(CaCl2，AＲ級(jí)別，含量≥96.05%，批號(hào)F20070731，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司提供)冰醋酸(CH3COOH，AＲ級(jí)別，含量≥99.5%，批號(hào)20091020，由北京化工廠提供)乙腈(CH3CN，色譜純，含量≥99.

16、9%，批號(hào)100606，由FisherScientific提供)。的保留時(shí)間約5～8min，鈉離子峰與奧美拉唑峰的分離度應(yīng)大于3.0，鈉離子峰與氯離子峰的分離度應(yīng)大于10。測(cè)定法:精密量取“2.2”項(xiàng)下氯化鈉對(duì)照品溶液20μL，分別注入液相色譜儀，以對(duì)照品溶液濃度(X，μgmL－1)與相應(yīng)峰面積(Y)進(jìn)行二階多項(xiàng)式回歸(Y=aX2bXc)，回歸方程的相關(guān)系數(shù)(r)應(yīng)不小于0.99再精密量取“2.3”項(xiàng)下供試品溶液進(jìn)樣20μL，以鈉離子峰

17、面積用二階多項(xiàng)式回歸方程按下述公式(1)計(jì)算出鈉離子含量(μgmL－1)。實(shí)驗(yàn)方法混合溶液的制備精密稱定氯化鉀11.75221mg、氯化鈉基準(zhǔn)品17.60mg、硫酸鋰12.05mg、碳酸氫鈉10.50mg、無(wú)水氯化鈣29.02mg、醋酸銅15.03mg、硫酸鎂17.3mg、奧美拉唑鈉對(duì)照品12.51mg，分別置10mL量瓶中，用60%乙腈水溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得用于確定各離子峰位的溶液精密量取上述各溶液1mL，于同一10mL量

18、瓶中，用60%乙腈水溶液稀釋至刻度，搖勻，即得。22氯化鈉對(duì)照品溶液的制備取氯化鈉工作基準(zhǔn)品(含量以100.0%計(jì))適量，105℃干燥至恒重后，精密稱定49.24mg，置50mL量瓶中，用50%乙腈水溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品儲(chǔ)備液(以鈉離子計(jì)，濃度為387.4μgmL－1)另精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液1.0mL，分別置200、100、50、25、10和5mL量瓶中，用50%乙腈水溶液依次稀釋至刻度，搖勻，分別制成從低濃度到高濃度

19、的系列對(duì)照品溶液(以鈉離子計(jì)濃度分別為1.94、3.87、7.75、15.50、38.74、77.48μgmL－1)。－b槡b2－4a(c－Y)(1)X=2a結(jié)果與討論建立HPLC－ELSD法測(cè)定奧美拉唑鈉中鈉離33.1子含量3.1.13.1.1.1專屬性?shī)W美拉唑與混合離子溶液的分離將“2.1”項(xiàng)制備的混合溶液進(jìn)樣20μL，記錄色譜圖至鈉離子峰保留時(shí)間的6倍以上，各峰按順序依次洗脫:奧美拉唑、Li、Na、K、Mg2、Cl－、Ca2(圖3