納豆激酶基因的克隆及表達(dá)研究.pdf

1、山東大學(xué)碩士學(xué)位論文納豆激酶基因的克隆及表達(dá)研究姓名：張霞申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專(zhuān)業(yè)：發(fā)酵工程指導(dǎo)教師：林建強(qiáng)20070520山東大學(xué)同等學(xué)力碩士學(xué)位論文摘要納豆是日本傳統(tǒng)的發(fā)酵食品，在日本已經(jīng)有兩千年的歷史。1987年日本的SumiH等從納豆中分離出了一種具有纖溶活性的蛋白激酶，稱(chēng)之為納豆激酶(nattokinasc，NK)。它由枯草牙孢桿菌產(chǎn)生，為堿性絲氨酸蛋白酶，因其具有很強(qiáng)的溶血栓能力，具有安全性好、半衰期長(zhǎng)、口服有效等優(yōu)點(diǎn)而受到了

2、廣泛的關(guān)注。納豆激酶由275個(gè)氨基酸組成，根據(jù)其氨基酸序列順序計(jì)算出該酶的相對(duì)分子質(zhì)量為27728。前納豆激酶原(preproNK)組成為381個(gè)氨基酸，在分泌過(guò)程中切除N端106個(gè)氨基酸殘基而形成275個(gè)氨基酸的成熟分子納豆激酶等電點(diǎn)為8603。在自然pH狀態(tài)和自然溫度下，該酶相對(duì)比較穩(wěn)定。近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)納豆激酶的基因序列和生理生化特性進(jìn)行的一系列研究表明，納豆激酶可被開(kāi)發(fā)成為一種新型的溶栓藥物。納豆激酶是目前發(fā)現(xiàn)的100多種具

3、有口服纖溶作用的物質(zhì)中最具潛力的纖溶蛋白酶。目前，國(guó)內(nèi)外一方面通過(guò)改良菌種和優(yōu)化納豆生產(chǎn)工藝等方法來(lái)提高納豆中納豆激酶活性，另一方面也進(jìn)行了許多對(duì)納豆桿菌液體發(fā)酵條件、納豆激酶的純化等方面有研究。本實(shí)驗(yàn)從枯草桿菌(納豆株)中提取基因組DNA，聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)擴(kuò)增分別獲得1072bp和1194bp的DNA片段，將基因片斷克隆到pMDl8一T載體上，篩選重組子，通過(guò)限制性?xún)?nèi)切酶、PCR技術(shù)和測(cè)序分析確定該重組子所含插入片段為納豆激酶