中草藥添加劑在水產動物中的研究進展

1、中草藥添加劑在水產飼料中的研究進展——水生生物學實驗室第四期讀書報告,報告人：王小娜指導老師：趙玉蓉,報告內容：,一、中草藥添加劑在水產飼料中的研究進展二、實驗安排及部分實驗用中草藥的功效簡介三、目前的實驗進展（已測定完成的指標）四、后續(xù)工作,一、中草藥添加劑在水產飼料中的研究進展,Concept,Concept,中草藥作為飼料添加劑中的綠色產品，具有天然、高效、毒副作用小，抗藥性不顯著、資源豐富以及性能多樣性等特點。

2、在提高動物生產性能和飼料利用率的同時，又能充分保證人體的健康，兼有藥性和營養(yǎng)性雙重作用，是化學合成飼料添加劑不可比擬的。因此，以中草藥替代抗生素的添加劑將越來越受到人們的關注，它的應用也會更加廣泛。,中草藥添加劑是由不同性味功能的中草藥根據(jù)中獸醫(yī)學和現(xiàn)代營養(yǎng)學理論配制而成，由于其種類繁多，結構復雜，成分多樣，因此，不同的中草藥添加劑其作用也不相同。有研究表明，中草藥不但含有大量的生物堿、揮發(fā)油、苷類、有機酸、鞣質、多糖及多種免疫活

3、性物質和一些未知的促生長活性物質，還含有一定量的蛋白質、氨基酸、糖類、礦物質、維生素、油脂、植物色素等營養(yǎng)物質。這些成分可以促進機體代謝和蛋白質及酶的合成，從而加速水產動物的生長發(fā)育，提高餌料轉化率，增強體質，降低發(fā)病率和死亡率。,1、中草藥添加劑的作用(1)提高生產性能，降低餌料系數(shù)水產動物同其它動物一樣，對餌料的色，香、味等都有感官上的要求。為了促進動物的采食，提高生產性能及餌料利用率、縮短養(yǎng)殖周期，有必要在飼料中添加一些這方面

4、的物質。陳斐等于1991年在鯉魚的飼料中添加2%的含有蒲公英，倉術、茴香等10多種中草藥配伍的添加劑，但多種維生素的添加量小于常量，對鯉魚的生長和產量沒有影響，說明中草藥含有比較豐富的維生素。,(2)增強體質，防治疾病由于中草藥本身具有消除和抑制自由基的生成及提高自由基酶類活性的作用，并含有各種微量元素，因此對防治疾病有一定的效果。掘報道，有200多種中草藥有殺菌、抑菌作用;有130多種中草藥能抗菌;有50多種中草藥對病毒有滅活或抑制

5、作用。,(3)改善水產品的品質根據(jù)資料記載，魚、蝦長期攝食含有大蒜粉的餌料，其肉質變得細嫩，肉味更香濃。日本大學藥學部高橋教授用加入2.5%杜仲粉末(中國產)的混合飼料喂養(yǎng)鱔魚，結果鱔魚蛋白膠厚度得到改善，肉質烹調后味道可與野生鱔魚媲美。冀獻民用杜仲喂鰻魚，發(fā)現(xiàn)魚體肌肉細嫩、味番、脂肪含量適中，高級不飽和脂肪酸含量較多。,(4)其它一些作用中草藥除具有上述作用外，還具有：①誘食作用：童圣英等于1998年報道，山楂含有大量的有機酸，對

6、皺紋盤鮑具有明顯的誘食作用;實驗證明，黃柏、繡球等對平均體長為8.Ocm的泥鰍有誘食作用;飼料中含0.25%陳皮的飼料對草魚的誘食效率最高，草魚咬餌次數(shù)和啄咬力分別為對照組的7.25倍和2.1倍。②防毒防腐作用：草藥中的香辛料及其精油中含有的抗菌成分，有不同程度的抗菌效力，特別是與化學防腐劑合用，其效果更佳，且不會影響水產動物的攝食。,2、中草藥在應用中存在的問題　　(1)科學配伍　　在進行中草藥配方設計時要考慮：①中草藥的十八反、

7、十九畏的條件性配伍，特別是維生素、微量元素、氨基酸等營養(yǎng)物質之間的協(xié)同與拮抗作用;②根據(jù)動物不同生長階段、養(yǎng)殖條件及季節(jié)，適時進行配方調整，以滿足動物不同狀態(tài)的需要;③由于產地、季節(jié)、炮制方法等因素不同，同一種中草藥其成品的性能也會有所差異，出現(xiàn)同樣的配方卻產生不同效果，故要注意穩(wěn)定藥材的質量。,(2)改進加工工藝①加工方法。目前中草藥添加劑大多以原料粉碎后攪拌而成，這對于用量較大而有效成分較低的根皮類等木質化程度較高的中草藥來說，要

8、保證其藥效，就必須大劑量的添加，這就增大了中草藥在日糧中的含量，其結果：一方面導致魚、蝦在同等攝食量的情況下攝入的營養(yǎng)物質相對不足，另一方面也會破壞飼料的適口性，使水產動物的采食量減少，直接影響動物的正常生長。②加工的粉末大小與其有效成分的釋出及動物的吸收也有很大關系。為了提高中草藥的效果，應采取先進的生產工藝(如浸提技術)，向微量化、專用型方向發(fā)展，這樣既可保證其藥效，又不影響日糧的營養(yǎng)水平。,3、中草藥添加劑的發(fā)展前景　　我國中

9、草藥資源十分豐富，而且多生長于深山荒野，無農藥污染，利用方便。由于中草藥有較好的防治疾病及一定的營養(yǎng)作用，對提高動物的生產性能和改善產品品質均有很好的效果，且對人類健康無危害，所以認為其性能優(yōu)于化學添加劑?！　∮捎谥胁菟幍某煞謴碗s，功效多樣，因此要應用現(xiàn)代科學技術手段，加強單味中草藥和配伍性能的研究，尤其是在進行中草藥添加劑配伍時，既要考慮動物防病治病的作用，又要考慮其營養(yǎng)保健作用。制定規(guī)范的中草藥添加劑的產品標準化，使相關的生產和研

10、究有章可循。另外，做添加劑的中草藥應選用不與人用的珍貴藥材(如人參)競爭的廉價資源，否則就會增大成本，降低經濟效益。,二、實驗安排及部分實驗用中草藥的功效簡介,“不同配伍的中草藥對鯽魚生產性能的影響”實驗，設計了五個不同的中草藥配伍，其作用有降脂、促生長、抗感染、提高免疫力等，旨在篩選出效果最好的一組配方，應用于以后的生產研究。五個中草藥配伍即為五個處理，每個處理設3個重復，水循環(huán)養(yǎng)殖系統(tǒng)養(yǎng)殖8周之后，取樣對其生長、免疫等生理生化指標進

11、行測定。,2010年7月——11月 養(yǎng)殖實驗2010年11月——2011年1月 分析實驗2011年1月——3月 實驗數(shù)據(jù)分析及文章的撰寫,1、茯苓：增強機體免疫功能，茯苓多糖有明顯的抗腫瘤及保肝臟作用。2、熟地：對骨髓造血系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)均有一定的影響。3、牡丹皮：抗炎、抑菌及免疫增強等作用。4、山茱萸：對體液免疫有促進作用，可加速血清抗體IgG、IgM形成。另外，還具有抗炎、抗菌、抗應激、抗氧

12、化等功效。5、澤瀉：降血脂、保護肝臟。6、山藥：具有促進干擾素生成和增加T 細胞數(shù)的作用。,7、車前草：具有抗病原微生物作用，對甲醛及右旋糖酐引起的炎性水腫, 有明顯的抑制作用。8、苧麻葉：散瘀消腫；解毒 。9、忍冬藤：抗菌、抗炎。10、黃芪：增強機體免疫功能、增強造血功能，改善物質代謝、增強性腺功能、抗應激、延緩衰老等作用。黃芪還具有保肝、抗?jié)兊茸饔?。黃芪多糖和黃芪皂苷是其主要有效成分。11、黨參：調整消化系統(tǒng)功能

13、、抗?jié)?。增強機體免疫功能、增強造血功能、抗應激、抑制血小板聚集等作用。,12、首烏：促進造血功能、增強免疫功能、降低血脂、保肝、調節(jié)內分泌、對消化系統(tǒng)也具有一定的調節(jié)作用。13、夏枯草：對痢疾桿菌、傷寒桿菌、霍亂弧菌、大腸桿菌、變形桿菌、綠膿桿菌和葡萄球菌、鏈球菌有抑制作用，抗菌譜較廣。14、冬瓜皮：富含蛋白質、糖類、維生素C。,15、決明子：抗菌、降血脂、抗血小板凝集。16、車前子：降低膽固醇含量。17、山楂：降血脂。18

14、、麥芽：助消化、降血糖、抗真菌。19、麥冬：提高動物的耐缺氧能力，調節(jié)消化系統(tǒng)功能。20、綠茶：降脂助消化、抗菌解毒。21、荷葉：荷葉中的生物堿有降血脂作用，,三、目前的實驗進展（已測定的指標）,1、免疫器官的重量1.1 頭腎體指數(shù)頭腎體指數(shù)= (頭腎重量/體重) @100%測算方法: 先稱量魚體重, 然后斷尾放血摘取頭腎, 生理鹽水稍加沖洗, 吸水紙吸干表面水分,立即稱重, 根據(jù)記錄數(shù)據(jù)上式計算。1.2 脾臟體指數(shù)脾臟

15、體指數(shù)= (脾臟重量/體重) @100%測算方法與同頭腎體指數(shù)相同。,2、免疫細胞的活性檢測2.1 紅、白細胞計數(shù)紅、白細胞的數(shù)量能夠反映機體的免疫水平。紅細胞稀釋液：NaCl 0.5gNa2SO4 2.5gHgCl2 0.25蒸餾水加至100ml計數(shù)紅細胞時，10微升的抗凝血用紅細胞稀釋液稀釋200倍后計數(shù)。紅細胞數(shù)＝5個中方格的中細胞數(shù)的和×50×稀釋倍數(shù)（個/mm3）

16、,白細胞稀釋液： 冰醋酸 1.5ml 1%龍膽紫 1ml蒸餾水加至100ml計數(shù)白細胞時，稀釋400倍后計數(shù)（具體稀釋倍數(shù)要根據(jù)預實驗的經驗來確定）。白細胞數(shù)＝4個大方格數(shù)中細胞數(shù)的和×2.5×稀釋倍數(shù)（個/mm3）,2.2 白細胞吞噬指數(shù)和吞噬百分比白細胞的吞噬活性與機體免疫狀況密切相關, 為非特異性免疫重要指標。白細胞吞噬指數(shù)( PI) = 100個多核型白細

17、胞中含菌總數(shù)/100吞噬百分比( PP) = 100個吞噬細胞中參與吞噬的細胞數(shù)/100) （1）吞噬源的制備將酵母菌接種在YPD液體培養(yǎng)基中，28—30℃震蕩培養(yǎng)48小時，離心集菌后，高溫滅活（加熱至80℃以上），最后將其濃度調整至1.0×108cells/ml（麥氏比濁法），備用。,（2）吞噬活性的測定0.2ml抗凝血中加入0.1ml吞噬源，搖勻，在28℃的恒溫水浴鍋中孵育45min，每隔10min搖動一次。取一滴

18、全血-酵母菌混合液于潔凈的載玻片上，推成薄血片，每個樣品3張，自然晾干后，加瑞氏-姬姆薩染液的A液400微升，染色1min，然后滴加B液800微升，讓其覆蓋于A液之上，后用洗耳球將A、B兩液吹勻，染色8—15分鐘，用蒸餾水洗去玻片上的染色液，自然晾干，用油鏡觀察記錄結果。,2.3 白細胞分類計數(shù) 有顆粒細胞白細胞 無顆粒細胞,淋巴細胞,嗜中性粒

19、細胞,單核細胞,嗜酸性粒細胞,嗜堿性粒細胞,1、 血液、體液免疫成分檢測除了免疫細胞的活性之外，魚體內其他一些指標的變化也能夠反映其免疫狀況。如血清中的抗體效價，血清溶菌酶（LSZ）的活性、堿性磷酸酶（AKP）和酸性磷酸酶（ACP）活性、超氧化物歧化酶（SOD）、酚氧化酶（MPO）、血清補體活性等等都可以作為評價魚體免疫功能的指標。,四、后續(xù)工作,其中，溶菌酶又稱胞壁質酶或N-乙酰胞壁質聚糖水解酶，是一種能水解致病菌中黏多糖的堿性酶。

20、主要通過破壞細胞壁中的N-乙酰胞壁酸和N-乙酰氨基葡糖之間的β-1,4糖苷鍵，使細胞壁不溶性黏多糖分解成可溶性糖肽，導致細胞壁破裂內容物逸出而使細菌溶解。溶菌酶還可與帶負電荷的病毒蛋白直接結合，與DNA、RNA、脫輔基蛋白形成復鹽，使病毒失活。因此，該酶具有抗菌、消炎、抗病毒等作用。,高等動物的酸性磷酸酶（ACP）作為體內巨噬細胞溶酶體的標志酶, 在體內直接參與磷酸基團的轉移和代謝, 主要存在于各臟器、血細胞和骨髓中。在魚類免疫研究中,

21、 也測定組織器官或血清中的磷酸酶活性。磷酸苯二鈉法測定組織或血清中AKP或ACP活力, 定義為1 g組織蛋白或100mL血清在37 e 與底物作用15 min產生1mg酚為單位。,超氧化物歧化酶（SOD）活性與機體免疫水平密切相關, 對于增強巨噬細胞的防御功能和整個機體的免疫機能有重要作用, 常作為機體非特異免疫功能指標。SOD活力定義為: 1 mL 反應液中SOD抑制率達50% 時所對應的SOD的量為1個亞硝酸鹽單位。根據(jù)試驗需要,

22、可以分別檢測總SOD(T2SOD)、銅鋅SOD ( ZnCu2SOD)和錳SOD(Mn2SOD）等。,補體是一類存在于人和脊椎動物血清中協(xié)助免疫反應的一組血清蛋白質。可被抗原-抗體復合物或微生物所激活，導致病原微生物裂解或被吞噬。 C3是補體系統(tǒng)的主要成分之一, 可以通過經典或旁路途徑激活。在盛有0. 5 mL 致敏羊紅細胞( SRBC)的試管中, 加入0. 5 mL 魚血清(空白對照組加入0. 85% 的NaCl溶液, 全溶對照組加入