急性毒性試驗(yàn)

1、實(shí)驗(yàn)一 急性毒性實(shí)驗(yàn),一、目的與要求1、學(xué)習(xí)急性毒性試驗(yàn)的方法，掌握LD50的測(cè)定方法。2、觀察馬錢子的毒性反應(yīng)。二、實(shí)驗(yàn)原理急性毒性試驗(yàn)是指受試動(dòng)物在一次大劑量給藥后所產(chǎn)生的毒性反應(yīng)和死亡情況。藥物毒性的大小，常用動(dòng)物的致死量來表示，因?yàn)閯?dòng)物生與死的生理指標(biāo)較其他指標(biāo)明顯、客觀、容易掌握。致死量的測(cè)定也較準(zhǔn)確。在測(cè)定致死量的同時(shí)，還應(yīng)仔細(xì)觀察動(dòng)物是否出現(xiàn)聳毛、倦臥、耳殼蒼白或充血、突眼、步履蹣跚、肌肉癱瘓、呼吸困難、昏迷、驚

2、厥、大小便失禁等不良反應(yīng)。,致死量的測(cè)定常以半數(shù)致死量為標(biāo)準(zhǔn)。半數(shù)致死量是指能夠引起試驗(yàn)動(dòng)物一半死亡的劑量，媽藥物致死量對(duì)數(shù)值，用符號(hào)LD50表示。由于LD50的測(cè)定較簡(jiǎn)便、可靠，而且穩(wěn)定，現(xiàn)已成為標(biāo)志動(dòng)物急性中毒程度的重要常數(shù)。LD50測(cè)定的方法有多種，如Bliss法、改進(jìn)寇氏法、簡(jiǎn)化機(jī)率單位法、累積插值法、機(jī)率單位-加權(quán)直線加歸法等等。以上方法雖各有特點(diǎn)，但都有共同的要求：（1）動(dòng)物：均選用體重17～22克健康小鼠（同次試驗(yàn)體重相

3、差不得超過4克），或選用體重120～150克（同次試驗(yàn)體重相差不得超過10克）健康大鼠作實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。性別相同或雌雄各半。,（2）給藥途徑：要求采用兩種給藥途徑，其中必須有一種與臨床所采用的相同。溶于水的藥物沿須測(cè)定靜脈注射的LD50。值得提出的是，臨床上雖然不用腹腔注射，但動(dòng)物實(shí)驗(yàn)因腹腔注射給藥方便，吸收迅速，頗為常用。若供試藥物在腹腔內(nèi)不引起強(qiáng)烈刺激或局部變化（如纖維性病變等），那么嚙齒類動(dòng)物腹腔注射的LD50，參數(shù)很接近于靜脈給藥的L

4、D50?？诜苿o法通過注射給藥途徑時(shí)，可只用胃腸給藥。（3）試驗(yàn)周期和觀察指標(biāo)：給藥后至少觀察7天。觀察期間應(yīng)逐日記錄動(dòng)物的毒性反應(yīng)情況和死亡動(dòng)物的分布。,（4）正式試驗(yàn)前，均須先用少量動(dòng)物進(jìn)行預(yù)試試驗(yàn)，大致測(cè)出受試藥物引起0%和100%死亡率的致死量范圍，然后安排正式試驗(yàn)。正式試驗(yàn)組數(shù)不得少于三個(gè)劑量組，一般選用4～5個(gè)劑量組，每組動(dòng)物數(shù)為10～20只。（5）報(bào)告LD50時(shí)需注明實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的種屬及品系、性別、體重范圍、給藥途徑及每

5、個(gè)劑量組動(dòng)物數(shù)等，還需注明受試藥物的配制方法、給藥劑量、各組劑量間的比值（一般以0.65～0.85為宜）、給藥容積、觀察時(shí)間及計(jì)算方法。還須標(biāo)出LD50的95%可信限。,三、實(shí)驗(yàn)材料和試劑,動(dòng)物：小鼠藥品：馬錢子水煎液器材：注射器、灌胃針頭、鼠籠,四、操作方法,1、預(yù)試實(shí)驗(yàn)：預(yù)試實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖菫榱苏页鲆饎?dòng)物0%（Dn）和100%（Dm）死亡的劑量，以便安排正式實(shí)驗(yàn)。預(yù)試實(shí)驗(yàn)一般采用少量動(dòng)物（6～9只小鼠）進(jìn)行，將動(dòng)物隨機(jī)分為3組，組間

6、劑量比值一般以1：0.5或1：0.7為宜。灌服或腹腔注射量以0.2ml/10g體重為度。預(yù)試實(shí)驗(yàn)應(yīng)進(jìn)行到找出Dn和Dm后方可安排正式實(shí)驗(yàn)。2、正式實(shí)驗(yàn)：在預(yù)試實(shí)驗(yàn)測(cè)得Dn和Dm的劑量范圍內(nèi)設(shè)4～6個(gè)劑量組，最多10組。最理想的結(jié)果是使LD50的上下各有2～3組。組數(shù)愈少，準(zhǔn)確性愈差。各劑量組的動(dòng)物要求相等，至少10只動(dòng)物（分組時(shí)應(yīng)注意分層隨機(jī)均勻化的原則）。本實(shí)驗(yàn)要求最大反應(yīng)率為100%，最小反應(yīng)率為0%， 或至少反應(yīng)率接近100%或

7、0%。組間劑量比值（1：K），常用1：0.8或1：0.75。如實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)相鄰劑量有重復(fù)的100%和0%反應(yīng)率時(shí)，應(yīng)將靠邊的組棄去不計(jì)，使大劑量組只有一個(gè)100%的反應(yīng)率，小劑量組也只有一個(gè)0%的反應(yīng)率。,分組完畢和各組劑量算出后，分組灌服或注射不同劑量的受試藥物。為能得到理想的結(jié)果，實(shí)驗(yàn)最好從中間劑量開始，以便從最初幾個(gè)劑量組動(dòng)物接受藥物后的反應(yīng)來判斷兩端劑量是否合適，便于調(diào)整劑量和組數(shù)。為了提高實(shí)驗(yàn)的精確度和節(jié)省藥物，受試藥物可按“低

8、比稀釋法”配置。即使每只動(dòng)物的用藥體積相等（0.2ml/10g），而溶質(zhì)不等。給藥后逐日觀察并記錄中毒反應(yīng)、死亡率和死亡情況。,五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果記錄與計(jì)算,公式1: （logLD50） X50=Xm-i(ΣP-05) 則LD50=log-1 X50公式2： Sx50=i* 公式3：LD50的95%可信限=lg-1（X50±1.96S X50） LD50的平均