豬嵴病毒分子流行病學(xué)及防制技術(shù)研究.pdf

1、豬嵴病毒（PKV）屬于小RNA病毒科(Picornaviridae)、Kobu病毒屬(Genus Kobuvirus)，目前該屬成員包括愛(ài)知病毒、牛嵴病毒和豬嵴病毒。PKV自2007年在匈牙利和中國(guó)的豬糞便樣品中被發(fā)現(xiàn)后，該病毒又相繼在泰國(guó)、日本、韓國(guó)、巴西等國(guó)家被發(fā)現(xiàn)，所以該病毒呈現(xiàn)世界性分布。
　　據(jù)報(bào)道，PKV在具有腹瀉癥狀的豬群中陽(yáng)性檢出率明顯高于無(wú)腹瀉癥狀的豬群，但該病毒是否與腸道相關(guān)疾病有關(guān)，尚不確切。為了解PKV在甘

2、肅省的流行狀況，對(duì)該省的幾個(gè)主要養(yǎng)豬場(chǎng)進(jìn)行了分子流行病學(xué)調(diào)查，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：203份樣品中有126份為PKV陽(yáng)性樣品，其中65份來(lái)自于仔豬的74份樣品，并且PKV的感染通常伴隨著豬流行性腹瀉病毒的發(fā)生。目前，PKV的分離純化仍舊是一個(gè)難題，而獲得純化的病毒是研究其基因功能、蛋白結(jié)構(gòu)、致病性及理化特征的基礎(chǔ)。因此，本研究運(yùn)用反向遺傳操作技術(shù)，通過(guò)對(duì)在甘肅省腹瀉仔豬群中較流行的CH441株全基因組序列及pBluscript KS(Ⅱ)載體進(jìn)行分

3、析，選擇了合適的酶切位點(diǎn)并擴(kuò)增出囊括PKV全基因組的各片段后，成功構(gòu)建出了PKV的全長(zhǎng)質(zhì)粒。
　　此外，動(dòng)物病毒性疾病作為對(duì)養(yǎng)殖業(yè)危害最嚴(yán)重的疾病之一，不僅影響著人們的生活還可能給人類(lèi)健康帶來(lái)嚴(yán)重威脅，如何控制該疾病的發(fā)生和發(fā)展成為目前我們必須克服的難題。3C蛋白作為小RNA病毒科病毒的共同裂解酶，不僅在病毒蛋白成熟過(guò)程中起著非常重要的作用，而且在抗病毒藥物打靶方面具有一定的研究?jī)r(jià)值。因此，表達(dá)3C蛋白并分析其結(jié)構(gòu)與功能，對(duì)制備豬

4、嵴病毒3C蛋白晶體具有十分重要的意義。3C蛋白作為豬嵴病毒的非結(jié)構(gòu)蛋白，其多克隆抗體在區(qū)分野毒和疫苗毒感染方面也起到非常重要的作用。本研究以中國(guó)西北地區(qū)PKV CH441株RNA為模板，通過(guò)軟件分析了3C蛋白的結(jié)構(gòu)與功能域，原核表達(dá)該重組蛋白后制備了其兔源多克隆抗體，為豬嵴病毒病的診斷與治療提供了物質(zhì)基礎(chǔ)。近年來(lái)，基因治療作為一種有效的疾病治療手段，正在被人們普遍接受。為探索PKV的基因治療方法，本試驗(yàn)以PKV CH441株RNA為模板