水稻長穗頸eui突變體長選3S最上節(jié)間基因表達(dá)研究.pdf

1、長選3S是從溫敏核不育系培矮64S群體中選育出來的一種對(duì)赤霉素敏感的長穗頸突變體，受一對(duì)隱性基因控制。本文以培矮64S為對(duì)照，采用水稻基因芯片和半定量RT—PCR技術(shù)對(duì)長選3S最上節(jié)間快速伸長期全基因組表達(dá)模式進(jìn)行分析，主要結(jié)果如下： 1、在具有60000個(gè)雜交點(diǎn)，代表36926個(gè)單一基因的的寡聚核苷酸基因芯片上，檢測(cè)到545個(gè)差異表達(dá)基因，其中有362個(gè)為上調(diào)表達(dá)的轉(zhuǎn)錄本，占差異表達(dá)基因的66.42％；183個(gè)為下調(diào)表達(dá)的轉(zhuǎn)錄

2、本，占差異表達(dá)基因的33.58％。通過半定量RT—PCR對(duì)差異基因做進(jìn)一步分析，結(jié)果與基因芯片結(jié)果一致，表明芯片結(jié)果中基因表達(dá)差異的可靠性高。 2、通過生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn)，這些差異表達(dá)的轉(zhuǎn)錄本包括信號(hào)傳導(dǎo)相關(guān)基因、膜及運(yùn)輸基因、細(xì)胞生長與凋亡相關(guān)基因、復(fù)制與修復(fù)相關(guān)基因、碳水化合物代謝相關(guān)基因，次生代謝物合成相關(guān)基因和其它功能未知基因。在信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)相關(guān)基因以及碳水化合物和次生代謝物相關(guān)基因中發(fā)現(xiàn)許多與節(jié)間伸長有關(guān)的基因。eui基因

3、可能通過影響這些相關(guān)基因的表達(dá)，實(shí)現(xiàn)最上節(jié)間快速伸長。 3、從芯片結(jié)果中選擇表達(dá)差異達(dá)10倍以上的2個(gè)基因進(jìn)行生物信息學(xué)分析，表明其為未知功能基因，其啟動(dòng)子區(qū)存在激素響應(yīng)元件，可能與激素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)有關(guān)。根據(jù)基因序列設(shè)計(jì)引物，通過RT—PCR擴(kuò)增，獲得了包含基因完整ORF的cDNA克隆。測(cè)序結(jié)果表明他們的序列與9311完全相同，而與日本晴存在堿基差異。構(gòu)建了該基因的過表達(dá)載體，并通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法成功將該基因轉(zhuǎn)化到擬南芥中，獲得了轉(zhuǎn)基