抗金黃色葡萄球菌奶牛乳腺炎疫苗的研制.pdf

1、金黃色葡萄球菌是一種重要的條件致病菌，能夠引起廣泛的感染。在感染早期，金黃色葡萄球菌通過表面黏附素的入侵、定殖寄主細(xì)胞，在這個(gè)過程中，表面黏附素中的兩個(gè)主要成員FnbpA和ClfA發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。針對(duì)金黃色葡萄球菌的侵染機(jī)制，我們以FnbpA和ClgA為免疫原基因，并且引入了大腸桿菌熱不穩(wěn)定腸毒素B（LTB）作為粘膜免疫佐劑，構(gòu)建了四組核酸疫苗pcDNA3.1-FnbpA、pcDNA3.1-LTB-FnbpA、pcDNA3.1-C

2、lfA、pcDNA3.1-ClfA-FnbpA，并且鑒于核酸疫苗可誘發(fā)較強(qiáng)的細(xì)胞免疫但體液免疫抗體滴度不甚理想的事實(shí)，又構(gòu)建了相應(yīng)基因的原核表達(dá)載體，高效表達(dá)蛋白，采取了“質(zhì)粒免疫/蛋白加強(qiáng)”這種免疫策略，利用小鼠動(dòng)物模型進(jìn)行鼻黏膜免疫，并對(duì)免疫效果進(jìn)行評(píng)價(jià)。
　　 ELISA實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示，ClfA組激發(fā)的IgG抗體水平略高于FnbpA組，但差異不顯著（P>0.05）：而FnbpA組產(chǎn)生的IgA抗體水平卻極顯著的高于ClfA組（

3、P<0.01），這說明FnbpA基因更有效的激發(fā)了黏膜免疫。通過血清活性實(shí)驗(yàn)可知，F(xiàn)nbpA組和ClfA組均成功的激發(fā)了抗金黃色葡萄球菌黏附蛋白的、有免疫調(diào)理活性的特異性抗體，無論是黏附抑制率還是巨噬細(xì)胞吞噬能力，F(xiàn)nbpA組都顯著強(qiáng)于ClfA組（P<0.05）。攻毒試驗(yàn)進(jìn)一步證明了FnbpA組比ClfA組更好的起到了對(duì)小鼠的保護(hù)作用，前者比后者攻毒保護(hù)率高出了13.49個(gè)百分點(diǎn)。雖然FnbpA組的免疫效果強(qiáng)于ClfA組，但這兩組的免疫

4、效果總體來說并不很理想，然而ClfA及FnbpA這兩個(gè)基因的融合組卻表現(xiàn)出了極強(qiáng)的免疫力。無論是抗體的激發(fā)，還是血清活性的檢測(cè)，乃至乳腺攻毒，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)都明顯的好于其它組，差異顯著（P<0.05）。
　　 總之，通過一系列實(shí)驗(yàn)我們證實(shí)了ClfA與FnbpA基因融合表達(dá)能夠更好的激發(fā)小鼠的免疫應(yīng)答作用，而在這兩個(gè)基因中，F(xiàn)nbpA起到的免疫效果比ClfA更加突出。同時(shí)也證實(shí)了LTB作為黏膜免疫佐劑的免疫增強(qiáng)功能，我們估計(jì)LTB、Cl