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1、廈門大學(xué)碩士學(xué)位論文ADAM10條件性基因打靶載體的構(gòu)建和鑒定姓名：林炤華申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：細(xì)胞生物學(xué)指導(dǎo)教師：王義權(quán)周常文20090701ConstructionandcharacterizationofADAMl0conditionalgenetargetingvectorPostgraduate：LinzhaohuaSupervisor：WangyiquanZhouChangwenAbstract[Object]：Const
2、ructionofADAMIOconditionalgenetargetingvectoristolaythefoundationofpreparingtheADAMIOconditionalknockoutmiceandtostudythefunctionofADAMIOgene[MaterialandMethod]：GenomicDNAfragmentssurroundingexon2ofADAMIOgenewereamplifie
3、dfrom129／SVJmicebyPCRPartialfragmentsofwhichweresequencedThe25kbshortarm、49kblongarmandtheexon2wereligatedtothetargetingskeletonvectorpL451，respectively，toformtheintermediatevectorpEFUDThefinaltargetingvectorpEFUDTKwasco
4、nstructedbyligatingtheHSV——TKgenefragmentisolatedfromthepSSC9plasmidtothevectorpEFUDInordertounderstandwhethertheNeoandHSV—。TKgeneinthefinalconstructplayanormalroleinvitor，theplasmidpEFUD—TK、pL451andpSSC9wereseparatelytr
5、ansfectedintohumanneuroblastomacells(SH—SY5Y)byLiPide2000(controlgroup：pSSC9、pL451andzero；testgroup：circularpEFUD—TKandlinearPEFUDTK)【Result】：Restrictionendonucleasedigestionshowedthattherestrictionmappingoflongarmandsho
6、rtarmisidenticalwiththatofthereportedsequencesfrom129／SVJmouseSequencingresultsindicatedthatthedeterminedsequencesarenearlythesameasthoseofthereportedsequences(998％)，especially，theexon2sequenceiscompletelyidenticalwithth
7、ereportedExon2、longarmandshortarmwereexactlyinsertedinpL451TheHSV—TKgenesequencefrompSSC9isalsothesameasthereportedThetargetingconstructvectorswerefinallycompletelyAfterthefollowingplasmidandconstructsweretransfectedinto
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