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文檔簡介
1、目的:研究骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞D1和成骨細(xì)胞MC3T3-E1、MC3T3-E1 subclone 14在基底應(yīng)變作用下NMDA型谷氨酸受體(NMDAR)的表達(dá)情況,探討NMDAR在成骨細(xì)胞力學(xué)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的作用和相關(guān)的信號通路。 方法:采用RT-PCR技術(shù),免疫熒光染色技術(shù),蛋白免疫印跡技術(shù)和體外細(xì)胞循環(huán)拉伸基底應(yīng)變刺激的方法,鑒定在骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞D1和成骨細(xì)胞MC3T3-E1、MC3T3-E1 subclone 14細(xì)胞系中NMDA
2、R的表達(dá)情況,研究MC3T3-E1 subclorle 14細(xì)胞的力學(xué)響應(yīng);利用NMDAR非競爭性抑制劑MK801、細(xì)胞外鈣離子內(nèi)流信號阻斷劑EGTA、細(xì)胞微絲骨架阻斷劑細(xì)胞松弛素D單獨(dú)應(yīng)用和聯(lián)合應(yīng)用的方法,以RT-PCR、WESTERN-BLOT技術(shù)研究NMDAR參與力學(xué)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的作用和相關(guān)的信號通路。 結(jié)果:骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞D1和成骨細(xì)胞。MC3T3-E1、MC3T3-E1 subclone 14三個細(xì)胞系均表達(dá)NMDAR必
3、須亞基1(NR1)和不同的亞基2(NR2A-D);轉(zhuǎn)錄因子AP-1、CBFA1/RUNX2參與了力學(xué)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的信號通路;阻斷NMDAR,阻斷細(xì)胞外鈣離子內(nèi)流,阻斷細(xì)胞微絲骨架,都分別部分的抑制了力學(xué)刺激誘導(dǎo)的ERK1/2信號通路的激活,而分別聯(lián)合應(yīng)用MK801+EGTA、MK801+CYTO D阻斷劑時則都基本抑制了力學(xué)刺激誘導(dǎo)的ERK1/2信號通路的激活。 結(jié)論:NMDAR在成骨細(xì)胞MC3T3-E1、MC3T3-E1 subc
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