不同時(shí)段應(yīng)用FK506納米微球緩釋顆粒促進(jìn)同種異體神經(jīng)移植再生的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、外周神經(jīng)損傷的修復(fù)一直是基礎(chǔ)和臨床應(yīng)用研究的一個(gè)熱門課題,許多學(xué)者從不同材料的外周神經(jīng)橋接到構(gòu)建組織工程化的外周神經(jīng)移植修復(fù)、藥物促進(jìn)軸突再生等方面進(jìn)行了不懈的努力，但研究重點(diǎn)大多仍是從自體神經(jīng)移植和藥物促進(jìn)軸突再生等方面入手。自體神經(jīng)移植存在著供體來(lái)源受限、以及遺留供區(qū)感覺(jué)功能障礙等缺點(diǎn)。由于免疫抑制劑的使用，異體神經(jīng)移植得到了很大的發(fā)展，目前在實(shí)驗(yàn)階段新型免疫抑制劑FK506被公認(rèn)為是該領(lǐng)域的首選藥物。本實(shí)驗(yàn)選擇FK506和聚乳酸-

2、三亞甲碳酸酯共聚物P(DLLA-co-TMC)共聚物為材料制作成P(DLLA-co-TMC)/FK506納米微球，在同種異體神經(jīng)移植的條件下，探討FK506納米微球?qū)ι窠?jīng)再生的促進(jìn)作用和最佳給藥時(shí)機(jī)。
　　 目的:
　　 1.P(DLLA-co-TMC)/FK506納米微球的制備與性能研究。
　　 2.探討同種異體移植后P(DLLA-co-TMC)/FK506納米微球促進(jìn)神經(jīng)的再生作用及最佳使用時(shí)間。
　　

3、 方法:
　　 1.采用單乳化-溶劑揮發(fā)法（O/W）制備P(DLLA-co-TMC)/FK506納米微球，精確稱取100 mg P(DLLA-co-TMC)和一定量的FK506溶于4 ml二氯甲烷，攪拌下用注射器緩緩將聚合物溶液注入40 ml 2％ PVA（w/v）（聚乙烯醇）水溶液中，室溫減壓攪拌下?lián)]發(fā)溶劑4～6 h，將所得微球離心分離，用蒸餾水洗數(shù)次，盡量除去微球表面的PVA。冷凍干燥（ALPHA2-4冷凍干燥機(jī)，CHRI

4、ST）48 h，得到白色粉末狀P(DLLA-co-TMC)載藥微球，室溫下干燥器中儲(chǔ)存?zhèn)溆谩?br>　　 2.同種異體移植SD大鼠脛神經(jīng)0.6cm，分別于術(shù)后即刻、24小時(shí)、3天將P(DLLA-co-TMC)/FK506納米微球局部放置于神經(jīng)吻合口周圍，按釋放率1㎎/㎏/d釋放30天，于術(shù)后不同時(shí)間點(diǎn)觀察局部反應(yīng)及結(jié)蒂組織包裹情況。測(cè)定患側(cè)小腿三頭肌濕重，以了解肌肉萎縮及運(yùn)動(dòng)功能恢復(fù)情況。
　　 3.對(duì)移植神經(jīng)段進(jìn)行HE染色，

5、光鏡下觀察神經(jīng)的生長(zhǎng)情況及測(cè)定有髓纖維數(shù)目。
　　 4.于取材前5天在移植神經(jīng)遠(yuǎn)端以遠(yuǎn)5㎜的神經(jīng)里注射真藍(lán)（true blue）逆行標(biāo)記神經(jīng)元，在熒光顯微鏡下觀察，測(cè)定標(biāo)記的神經(jīng)元胞體的總數(shù)。
　　 5.將右側(cè)脛神經(jīng)以外的所有坐骨神經(jīng)分支均在起始部切斷，用Medtronic肌電圖分析儀的記錄電極置于小腿三頭肌的肌腹中，用針灸針插入大鼠尾部并接地，將刺激電極置于脛神經(jīng)的遠(yuǎn)近端進(jìn)行刺激，分別得出患側(cè)的神經(jīng)傳導(dǎo)速度和各自的健側(cè)

6、對(duì)比。
　　 結(jié)果:
　　 1.P(DLLA-co-TMC)/為包封材料，采用O/W制備了負(fù)載FK506的聚合物微球，考察了藥物濃度對(duì)負(fù)載率的影響，確定聚合物與藥物質(zhì)量比為100:10。
　　 2.FK506納米微球可以抑制同種異體移植的排斥反應(yīng)，改善了移植段脛神經(jīng)的局部微環(huán)境。
　　 3.術(shù)后8、12周立即使用FK506納米微球組和24小時(shí)給藥組促使小腿三頭肌恢復(fù)的效果相似，好于3天給藥組和未給藥組，有

7、顯著性差異，而3天給藥組和未給藥組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 4.FK506納米微球促進(jìn)了雪旺細(xì)胞的增殖，術(shù)后4、8、12周測(cè)定的有髓神經(jīng)纖維數(shù)立即給藥組和24小時(shí)給藥組明顯多于3天組和未給藥組；而3天組和未給藥組有顯著性差異。
　　 5.FK506納米微球?qū)ι窠?jīng)元有保護(hù)作用，能促進(jìn)其恢復(fù)，術(shù)后4、8、12周true blue標(biāo)記的運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元數(shù)立即給藥組和24小時(shí)給藥組明顯多于3天組和未給藥組；而3天組和未給藥組有顯著性差

8、異。
　　 6.FK506納米微球促進(jìn)電生理的恢復(fù)，術(shù)后12周脛神經(jīng)的傳導(dǎo)速度較未給藥組大大增快，而立即給藥組和24小時(shí)給藥組快于3給藥組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)論:
　　 1.P(DLLA-co-TMC)/FK506納米微球最佳質(zhì)量比為100:10。
　　 2.FK506納米微球降解吸收好，釋藥速度符合神經(jīng)損傷后再生的規(guī)律。
　　 3.局部使用FK506納米微球促進(jìn)神經(jīng)再生作用明顯，而且所