豬星狀病毒分離鑒定和分子流行病學調查及生物學特性研究.pdf

1、星狀病毒(Astrovirus，AstV)屬于人獸共患病病原，與多種動物的腹瀉性疾病有關，目前廣泛分布于世界各地。星狀病毒常同冠狀病毒、輪狀病毒、嵌杯狀病毒及其它腸道病毒混合感染造成急性胃腸炎，尤其對小孩及幼畜危害最大。本研究對豬星狀病毒進行分離鑒定和分子流行病學調查及生物學特性研究，將為今后預防豬星狀病毒感染和傳播提供實驗方法和手段。
　　 通過對廣西某豬場經RT-nPCR檢測呈豬星狀病毒陽性的糞樣進行病毒分離，獲得兩株能在P

2、K-15細胞上增殖，并能使該細胞變大、胞漿內出現(xiàn)顆粒，最后細胞破碎、脫落等細胞病變的病毒；在電鏡下觀察，該病毒呈典型的星狀結構，直徑約28～35nm;動物實驗顯示，攻毒豬出現(xiàn)溫和性腹瀉，體重減輕，腸系膜淋巴結腫大和腸絨毛變短等臨床癥狀和在絨毛上皮細胞層及絨毛腔有大量淋巴細胞及少量巨噬細胞浸潤等病理變化。病毒的成功分離，為豬星狀病毒分子生物學以及致病機制的研究提供材料。
　　 應用RT-nPCR方法，對采自廣西7個市縣27個不同規(guī)

3、?；i場和廣東湛江2個不同規(guī)?；i場共315份豬腹瀉樣品進行檢測，結果顯示豬場陽性率達82.8％(24/29)；樣品陽性率達40.3％(127/315)；0～30日齡的小豬感染率最高，達44.9％(53/118)；春季(2～4月)感染率最高，為54.3％(38/70)。調查結果表明，豬群中普遍存在豬星狀病毒感染。另外，本研究克隆所得46株PAstVs核苷酸同源性為84.6％～100％，氨基酸同源性為51.1％～100％，遺傳進化分析顯示

4、克隆所得46株PAstVs均屬于豬星狀病毒Ⅰ型，且又可分為5個亞群。這是首次對我國豬場進行大規(guī)模豬星狀病毒分子流行病學研究。
　　 參考GenBank上發(fā)表的豬星狀病毒亞基因組序列，設計1對引物，對豬星狀病毒廣西流行株衣殼蛋白基因進行擴增，最終克隆得到PAstV/NNJG7株的衣殼蛋白完整序列?；蚍治霭l(fā)現(xiàn)，其ORF2全長2358bp，編碼786個氨基酸；與PAstV-Ⅰ型參考株核苷酸同源性最高，為77.3％～79.4％；在OR