豬圓環(huán)病毒2型的分子流行病學(xué)研究.pdf

1、豬圓環(huán)病毒2型(PCV2)是引起豬斷奶后多系統(tǒng)衰竭綜合征等相關(guān)疾病的重要病原。本文采用分子流行病學(xué)技術(shù)，系統(tǒng)分析了我國(guó)PCV2流行毒株的基因型、優(yōu)勢(shì)基因型和非優(yōu)勢(shì)基因型的轉(zhuǎn)錄差異、優(yōu)勢(shì)基因型流行的分子機(jī)制、ORF1基因和ORF2基因的進(jìn)化。 采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)技術(shù)對(duì)來自北京等地區(qū)的173份PCV2陽性樣本的全長(zhǎng)ORF2基因進(jìn)行了擴(kuò)增，并對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行了限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性(RFLP)分析。結(jié)果表明，我國(guó)PCV2流行毒株

2、可分為9種(A～I(xiàn))基因型。 采用Northern blot和RT-PCR技術(shù)對(duì)PCV2優(yōu)勢(shì)基因型(CHN-2H)的代表毒株(GD)和非優(yōu)勢(shì)基因型(CHN-2A)的代表毒株(BF)進(jìn)行了PK15細(xì)胞培養(yǎng)的基因轉(zhuǎn)錄分析。結(jié)果表明，二者的轉(zhuǎn)錄本之間存在量和質(zhì)的差別。 采用PCV2非優(yōu)勢(shì)基因型(CHN-2A)感染性克隆，基于PCV2優(yōu)勢(shì)基因型(CHN-2H)和非優(yōu)勢(shì)基因型(CHN-2A)之間基因轉(zhuǎn)錄本存在的差異，運(yùn)用基因組定點(diǎn)

3、突變技術(shù)構(gòu)建了4個(gè)PCV2分子克隆，經(jīng)體外轉(zhuǎn)染PK15細(xì)胞和傳代，用免疫酶組化染色和PCR技術(shù)分析拯救病毒的復(fù)制與增殖，結(jié)果表明，所有突變均不影響PCV2的DNA復(fù)制，在CR內(nèi)部造成點(diǎn)突變的分子克隆(C3)也不影響病毒蛋白的合成。 采用PCR技術(shù)，對(duì)PCV2 BF株的PK15細(xì)胞不同代次的培養(yǎng)物和臨床血清樣品進(jìn)行了PCV2基因的檢測(cè)。結(jié)果表明，PCV2的ORF1基因是不穩(wěn)定的，易被丟失或降解；而ORF2基因較為穩(wěn)定，完整的或部分