經(jīng)鼻給予TGF-β1對匹羅卡品誘導(dǎo)的癲癇持續(xù)狀態(tài)大鼠海馬炎性細(xì)胞因子的影響.pdf

1、目的：我們以往的研究表明實(shí)驗(yàn)性癲癇持續(xù)狀態(tài)后給予外源性TGF-β1有顯著的抗癲癇作用。本研究運(yùn)用無創(chuàng)、簡單有效的繞過血腦屏障的鼻腔給藥方法,對匹羅卡品癲癇持續(xù)狀態(tài)(status epilepticus,SE)后大鼠進(jìn)行轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)滴鼻干預(yù),通過檢測癲癇急性期大鼠海馬細(xì)胞因子IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-18蛋白表達(dá)的差異,探討TGF-β1潛在的抗癲癇作用中可能存在的炎性機(jī)制。
　　資料和方法：

2、　　1.TGF-β1滴鼻入腦檢測實(shí)驗(yàn)
　　選用成年健康雄性SD大鼠8只,隨機(jī)分為TGF-β1滴鼻組和對照組(Control組),每組4只。TGF-β1滴鼻組動物給予TGF-β1滴鼻,對照組給予同體積的PBS替代。滴鼻后1h,兩組大鼠分別被處死,完整腦組織被取出,生理鹽水洗凈后快速置于液氮罐中儲存。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(Elisa)檢測兩組大鼠腦組織勻漿液中TGF-β1含量。組間比較采用兩組獨(dú)立樣本的t檢驗(yàn),P<0.05定義為差異有

3、統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　2.TGF-β1對SE后處理對大鼠海馬炎性細(xì)胞因子的影響
　　選擇健康雄性SD大鼠126只參加實(shí)驗(yàn),90只用于建立匹羅卡品(pilocarpine)癲癇持續(xù)狀態(tài)模型。SE后90min注射地西泮10mg/kg終止SE,SE后3h動物被隨機(jī)分為三組,正常對照組(Normal組)、匹羅卡品組(Pilo組)、TGF-β1處理組(TGF組)。分組后對所有動物滴鼻處理,TGF組滴入重組人TGF-β1,Pilo組和Nor

4、mal組大鼠給予等容量PBS溶液。各組動物于SE后24h、48h、72h處死取材,應(yīng)用免疫組化觀察海馬區(qū)各炎性細(xì)胞因子的表達(dá)及分布特征,采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(Elisa)檢測海馬組織IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-18蛋白含量。采用單因素方差分析(ANOVA)檢驗(yàn),組間比較用SNK(Students-Newman-Keuls)法即q檢驗(yàn),P﹤0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;P﹤0.01為有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　

5、　1.TGF-β1滴鼻后腦組織TGF-β1含量迅速上調(diào):滴鼻后1h,TGF-β1滴鼻組動物腦組織中TGF-β1含量顯著高于對照組動物。
　　2.TGF-β1對SE后處理抑制了大鼠促炎性細(xì)胞因子的表達(dá)
　　2.1、細(xì)胞因子免疫組化:正常對照組大鼠各時間點(diǎn)細(xì)胞因子陽性表達(dá)不明顯;IL-1β和TNF-α在SE后24h海馬CA1區(qū)有膠質(zhì)樣陽性細(xì)胞出現(xiàn),而IL-6和IL-18在24h陽性細(xì)胞表達(dá)即少量彌散分布于海馬各區(qū);IL-1β和I

6、L-6染色表現(xiàn)為較多膠質(zhì)細(xì)胞和少許神經(jīng)元表達(dá),而TNF-α及IL-18僅見于膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá);與Pilo組比較,TGF組IL-1β、TNF-α、IL-6三種細(xì)胞因子陽性細(xì)胞平均光密度值表達(dá)在72h減少有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P﹤0.05),而IL-18各時間點(diǎn)兩組間平均光密度值未見明顯差異。
　　2.2、細(xì)胞因子Elisa定量檢測:與正常對照組比較,SE后大鼠海馬內(nèi)IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-18增加明顯;TGF組較Pilo組比較,

7、SE后24h、48h、72h,TGF組動物海馬內(nèi)的IL-1β、TNF-α、IL-6蛋白含量均明顯減少(P﹤0.05或P﹤0.01),而IL-18蛋白含量兩組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P﹥0.05);TGF組和Pilo組大鼠在各時間點(diǎn)隨SE后時間的延長,IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-18蛋白含量呈快速上調(diào)趨勢,Pilo組同TGF組變化趨勢基本一致。
　　結(jié)論：
　　在匹羅卡品癲癇狀態(tài)后經(jīng)鼻給予外源性TGF-β1可以減少癲癇