PRV和PCV2混合感染致病特點(diǎn)及豬偽狂犬病防控技術(shù)研究.pdf

1、豬偽狂犬病毒(pseudorabies virus，PRV)和豬圓環(huán)病毒2型(porcine circovirus type2，PCV2)都能使豬發(fā)病和產(chǎn)生免疫抑制，二者混合感染引起發(fā)病豬病情加重及豬場(chǎng)重大經(jīng)濟(jì)損失，但二者混合感染導(dǎo)致機(jī)體損傷及致病的機(jī)理還不清楚。深入研究豬圓環(huán)病毒2型脅迫下豬偽狂犬病防控機(jī)制，能為種豬場(chǎng)豬偽狂犬病凈化提供理論支持。本試驗(yàn)通過(guò)人工單獨(dú)和混合感染PRV和PCV2，通過(guò)分離病毒、熒光定量PCR以及血液生理生化

2、指標(biāo)和血清感染抗體的測(cè)定，研究PRV和PCV2混合感染的致病機(jī)制;并對(duì)云南省72家規(guī)模豬場(chǎng)進(jìn)行了豬偽狂犬病凈化綜合防控技術(shù)的研究。
　　1.PRV和PCV2混合感染仔豬的臨床病理學(xué)研究
　　PRV和PCV2都是豬的重要傳染病。PRV可以引起豬的繁殖障礙及呼吸道疾病;PCV2引起豬的斷奶后多系統(tǒng)消耗綜合征、繁殖障礙、皮炎與腎病綜合征及呼吸道病綜合征等多種疾病。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)人工單獨(dú)感染PRV、單獨(dú)感染PCV2、混合感染PRV和PC

3、V2，對(duì)感染仔豬后出現(xiàn)的臨床癥狀、病理變化進(jìn)行觀察。結(jié)果表明:混合感染PRV和PCV2的仔豬出現(xiàn)的病理癥狀比單獨(dú)感染病毒產(chǎn)生的癥狀嚴(yán)重。PRV單獨(dú)感染仔豬表現(xiàn)為特有的“發(fā)熱-神經(jīng)癥狀-奇癢-嘔吐（腹瀉）”癥狀;PCV2單獨(dú)感染仔豬表現(xiàn)為“發(fā)熱-呼吸困難-消瘦-貧血”等多系統(tǒng)功能衰竭綜合癥;而PRV和PCV2混合感染仔豬表現(xiàn)為“發(fā)熱-消瘦-神經(jīng)衰竭-嘔吐-死亡”等特征性臨床癥狀;單獨(dú)感染PRV或PCV2組的仔豬沒(méi)有出現(xiàn)死亡，而混合感染PR

4、V和PCV2組的仔豬在感染后第14d全部死亡。顯微觀察可見(jiàn)，攻毒后第3d-35d，感染仔豬的心、肝、脾、肺、腎、淋巴結(jié)和小腦均出現(xiàn)明顯的顯微病理變化?；旌细腥咀胸i的組織病理變化要比單感染PRV或PCV2的病變嚴(yán)重，單感染PRV比單獨(dú)感染PCV2仔豬的顯微病理變化嚴(yán)重，對(duì)照組無(wú)病理變化。
　　2.人工感染PRV和PCV2仔豬組織器官病毒載量消長(zhǎng)規(guī)律研究
　　通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法，對(duì)單獨(dú)感染PRV或PCV2組，混合感染PR

5、V和PCV2組，在攻毒后第3、7、14、21、35d，隨機(jī)取2頭仔豬宰殺，取心、肝、脾、肺、腎、腹股溝淋巴結(jié)、小腦7個(gè)組織器官;采集感染仔豬的血液、肛門(mén)拭子，鼻拭子進(jìn)行病毒載量測(cè)定，分析樣品中的帶毒情況及排毒變化規(guī)律。結(jié)果:7個(gè)組織器官混合感染組的組織病毒載量比單獨(dú)感染PRV組或PCV2組高，PRV的載量比PCV2高;病毒載量由高到低依次為肺臟、腹股溝淋巴結(jié)、肝臟、脾臟、腎臟、小腦、心臟。其中混合感染組PRV病毒載量在第14d最高，單獨(dú)

6、感染PRV組的病毒載量在第7天最高;單獨(dú)感染PCV2組的病毒載量在第14天最高;結(jié)合感染豬的病理變化分析表明，病毒載量越高仔豬表現(xiàn)臨床癥狀越明顯，組織器官損傷越嚴(yán)重。混合感染組的病毒載量最高，發(fā)病最嚴(yán)重并出現(xiàn)仔豬死亡，組織器官嚴(yán)重?fù)p傷。對(duì)感染組仔豬的血液、肛門(mén)拭子、鼻拭子中的載毒量測(cè)定發(fā)現(xiàn)，混合感染組和PRV單獨(dú)感染組的載毒量在感染后第7d-14d處于較高水平;而PRV單獨(dú)感染組在感染中后期持續(xù)排毒;PCV2單獨(dú)感染組的血液中病毒載量最

7、高、出現(xiàn)病毒的時(shí)間最早，但是感染后期排毒水平較低，可見(jiàn)PCV2感染是在感染早中期對(duì)外排毒嚴(yán)重，感染后期對(duì)外排毒減少。
　　3.PRV和PCV2混合感染對(duì)仔豬免疫抑制影響的研究
　　采集感染病毒仔豬血液，應(yīng)用ELISA方法檢測(cè)血清中IL-4、IL-6、IL-10和IFN-γ四種細(xì)胞因子、補(bǔ)體C3、C4、IgG的含量和紅細(xì)胞、血紅蛋白、白細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、中性細(xì)胞及血小板的數(shù)量。結(jié)果:與單獨(dú)感染PRV或PCV2組比較，混合感染PR

8、V和PCV2組的IL-4、IL-10和IFN-γ效價(jià)在感染后第3-14d呈上升趨勢(shì)，并都高于2個(gè)單獨(dú)感染組;IL-6在第0-3d快速下降，低于單獨(dú)感染PRV組;表明在感染早期混合感染組仔豬的體液和細(xì)胞免疫都參與了抗病毒的反應(yīng)?；旌细腥窘M的C3效價(jià)在第0-3d上升，第7-21d下降，并明顯低于2個(gè)單獨(dú)感染組; C4效價(jià)呈上升趨勢(shì)，但明顯低于2個(gè)單獨(dú)感染組的C4效價(jià)。混合感染組的免疫球蛋白IgG含量在0-14d均低于2個(gè)單獨(dú)感染組，說(shuō)明混合

9、感染組的仔豬在感染前期，其免疫系統(tǒng)就已受到抑制。混合感染組的紅細(xì)胞、血紅蛋白、中性粒細(xì)胞數(shù)量均高于單獨(dú)感染PCV2組和PRV組;感染仔豬的血清抗體檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，混合感染PRV和PCV2組中，抗PRV的抗體顯著低于單獨(dú)感染PRV組，抗PCV2抗體與單獨(dú)感染PCV2的抗PCV2抗體無(wú)差異性。以上結(jié)果表明，混合感染造成的免疫抑制比單獨(dú)感染組的嚴(yán)重。
　　4.PRV和PCV2混合感染豬偽狂犬病防控技術(shù)研究及示范
　　近年來(lái)云南省豬偽

10、狂犬病居高不下，為優(yōu)化豬偽狂犬病的防控技術(shù)，本試驗(yàn)選擇規(guī)模適中的3個(gè)PRV、PCV2感染陽(yáng)性的種豬場(chǎng)，設(shè)計(jì)了三種凈化方案，即A場(chǎng):檢測(cè)凈化PRV、PCV2感染抗體陽(yáng)性豬，免疫豬偽狂犬基因缺失疫苗;B場(chǎng):檢測(cè)凈化豬偽狂犬感染抗體陽(yáng)性豬，免疫PRV基因缺失疫苗;C場(chǎng):檢測(cè)凈化PRV和PCV2感染抗體陽(yáng)性豬，同時(shí)免疫PRV基因缺失和PCV2疫苗，并分析這三種防控方法的豬場(chǎng)凈化績(jī)效。結(jié)果表明，三種凈化方法均能控制豬場(chǎng)豬偽狂犬病，C場(chǎng)凈化2種病毒

11、，同時(shí)接種2種疫苗情況下凈化效果最好。在此基礎(chǔ)上，研究制訂了豬偽狂犬病凈化技術(shù)規(guī)程，2012-2015年在云南省72家規(guī)模豬場(chǎng)和1個(gè)示范縣進(jìn)行示范，并用ELISA方法檢測(cè)感染抗體7516份和免疫抗體8696份。結(jié)果顯示:2012年、2013年、2014年、2015年豬偽狂犬病野毒感染率分別是24.42％、5.47％、2.78％、2.69％;其中種公豬感染率分別為18.25％、12.36％、8.33％、3.15％;種母豬的感染率分別為24