聚乳酸順鉑磁性微球靶向治療肺癌的實驗研究.pdf

1、目的：自行制備抗腫瘤藥物聚乳酸順鉑磁性微球(PLA-CDDP-MMS)，并對其特性進行檢測，評價其體外藥物緩釋性與磁響應性，為肺癌綜合靶向治療提供實驗材料，為下一步實驗奠定基礎。 方法：采用復乳溶劑揮發(fā)法制備包裹順鉑和納米級Fe3O4磁粉的聚乳酸微球，將順鉑100mg、Fe3O4納米磁粉50mg、加至濃度2.5％的聚乳酸二氯甲烷溶液4ml中，經(jīng)超聲乳化分散，加入分散相中，攪拌速度1500r.min-1，成型溫度25℃。用光學顯微

2、鏡，電子顯微鏡觀察形態(tài)，測定粒徑。用紫外分光光度儀測定載藥量，原子吸收光譜儀測定釋放率，外加磁場下觀察磁響應性。 結論：聚乳酸順鉑磁性微球在體外具有較好的磁響應性和藥物緩釋性，可作為磁靶向抗腫瘤藥物載體。 目的：驗證自行制備的聚乳酸順鉑磁性微球在體外對人肺腺癌A549細胞的藥物活性，和對裸鼠移植肺腺癌的抑制作用。 方法：1.采用MTT法分析聚乳酸順鉑磁性微球對人肺腺癌A549細胞體外的殺傷作用。設立試驗組及對照組

3、，試驗組分別加入CDDP溶液、PLA-CDDP-MMS懸液、PLA-MMS懸液。每種藥物7個濃度，每個濃度做4個平行孔，酶標儀測光吸收度，根據(jù)每個濃度的吸光度值，算出相應的細胞抑制率(IR)。 2.計數(shù)細胞密度觀察不同藥物對人肺腺癌A549細胞生長曲線的影響：設立CDDP組、PLA-CDDP-MMS組、PLA-MMS組、對照組。從接種時間算起，分別在12h、24h，、48h、72h于倒置顯微鏡下用紅細胞計數(shù)臺采用盲法計數(shù)，至第3

4、天結束。以培養(yǎng)時間(h)為橫坐標、細胞密度(×104個/ml)為縱坐標，繪制培養(yǎng)細胞的生長曲線。 3.觀察聚乳酸順鉑磁性微球對裸鼠移植肺腺癌的治療效果：裸鼠左腋皮下接種人肺腺癌A549細胞，建立裸鼠移植肺腺癌模型，將荷瘤裸鼠分為3組(對照組、CDDP組、PLA-CDDP-MMS組)，觀察腫瘤體積變化和腫瘤生長率、腫瘤抑制率(TIR)、腫瘤壞死程度、治療后荷瘤裸鼠自然存活時間及生命延長率(ILS)。 結果1.MTT法結果顯

5、示在最底濃度0.04g/ml時，三組藥物對人肺腺癌A549細胞的抑制率IR均較低，三組比較無明顯差異(P＞0.05)；在0.08～2.0μg/mlCDDP組IR明顯高于PLA-CDDP-MMS組，P＜0.05；在4.0～8.0μg/mlCDDP組與PLA-CDDP-MMS組IR無顯著差異(P＞0.05)；在0.04～4.0μg/mlCDDP組與PLA-CDDP-MMS組藥物對人肺腺癌A549細胞的抑制率IR均隨濃度的增加而增加；但在4.

6、0～8.0μg/ml隨濃度的增加IR增加幅度不明顯。PLA-MMS在0.2～40.0μg/ml濃度增加200倍，但細胞抑制率無顯著增加。 2.細胞密度計數(shù)結果顯示隨著培養(yǎng)時間的延長，細胞數(shù)均有不同程度的增加，在72hCDDP組與對照組比，P＜0.001；PLA-CDDP-MMS組與對照組比，P＜0.01；CDDP組與PLA-CDDP-MMS組比，P＜0.05，說明含順鉑相同劑量時，前者對肺腺癌A549細胞生長曲線的影響更加明顯；

7、PLA-MMS組與對照組各時間點計數(shù)接近，說明其對肺腺癌A549細胞生長無明顯影響。 3.荷瘤裸鼠治療前各組腫瘤體積比較無明顯差異，治療后對照組腫瘤體積明顯增大，差異有顯著性(P＜0.001)；CDDP組治療后體積也有增大，和治療前比較差異有顯著性(P＜0.01)；PLA-CDDP-MMS組治療后體積稍有縮小，但和治療前比較差異無顯著性(P=0.061)；治療后治療組體積和對照組比較差異均有顯著性(P＜0.01)；和CDDP組比

8、較，PLA-CDDP-MMS組體積縮小明顯，差異有顯著性(P＜0.01)；CDDP組TIR為22.4％，PLA-CDDP-MMS組為64.6％，與CDDP組比P＜0.01。病理組織學觀察：對照組腫瘤細胞生長活躍，CDDP組以中度壞死為主；PLA-CDDP-MMS組以重度壞死為主。PLA-CDDP-MMS組存活時間明顯延長，平均(45.6±5.8)天；而CDDP組平均存活時間(26.7±2.3)天，和對照組(23.3±3.5)天比無顯著性

9、差異，P=0.36。 結論：1.本實驗制備的聚乳酸順鉑磁性微球在體外對人肺腺癌A549細胞有抑制作用，并存在濃度依賴關系； 2.本實驗制備的聚乳酸順鉑磁性微球對裸鼠移植肺腺癌有顯著抑制作用，能使荷瘤裸鼠平均生存時間明顯延長。 目的：1.研究PLA-CDDP-MMS在大鼠體內的藥物緩釋性和外加磁場作用下對大鼠肺組織的靶向性； 2.比較肺動脈灌注PLA-CDDP-MMS與灌注CDDP游離藥物、灌注CDDP并結

10、扎肺動脈時藥物動力學變化。 方法：1.經(jīng)大鼠尾靜脈注入CDDP溶液、PLA-CDDP-MMS懸液，測定在不同時間點CDDP組、靶向組和非靶向組大鼠體內藥物動力學變化，及靶肺鐵原子含量。并比較CDDP組和微球組在用藥后168h血常規(guī)變化；并對實驗動物的肺、腎、肝行組織學檢查，了解栓塞情況；2.經(jīng)選擇性肺動脈灌注CDDP溶液、PLA-CDDP-MMS懸液，測定CDDP灌注組、CDDP灌注+結扎組、及PLA-CDDP-MMS灌注+磁場