MTSS1在肝癌細(xì)胞系中的生物學(xué)功能的研究.pdf

1、目的：研究DNMT3B調(diào)控MTSS1基因表達(dá)的可能機(jī)制，初步探索MTSS1在肝癌中的生物學(xué)功能。 方法：應(yīng)用ChIP的方法分析DNMT3B與MTSS1是否直接結(jié)合，以luciferase實(shí)驗分析DNMT3B結(jié)合MTSS1啟動子區(qū)對其活性的影響。分別構(gòu)建MTSS1 siRNA和MTSS1過表達(dá)穩(wěn)定表達(dá)載體，對肝癌細(xì)胞系進(jìn)行轉(zhuǎn)染，建立MTSS1表達(dá)抑制和過表達(dá)的穩(wěn)定肝癌細(xì)胞系研究模型，以XTT法檢測MTSS1對肝癌細(xì)胞系增殖能力的影

2、響；企業(yè)技術(shù)檢測MTSS1對肝癌細(xì)胞系細(xì)胞周期的影響；軟瓊脂克隆形成實(shí)驗及結(jié)晶紫染色法檢測MTSS1對肝癌細(xì)胞系克隆形成能力的影響；以鼠成纖維細(xì)胞系NIH3T3作為研究對照，進(jìn)一步驗證MTSS1的對克隆形成能力的影響。 結(jié)果：ChIP后行MTSS1上游的啟動子區(qū)PCR，F(xiàn)2（-864/-645）片段的位置有特異性的擴(kuò)增，表明該片段與DNMT3B結(jié)合。luciferase實(shí)驗分析發(fā)現(xiàn)，DNMT3B通過與MTSS1的啟動子F2區(qū)結(jié)合

3、，抑制了MTSS1啟動子的活性。XTT法檢測細(xì)胞增殖能力的結(jié)果表明，MTSS1表達(dá)抑制前后及MTSS1過表達(dá)前后對肝癌細(xì)胞系的細(xì)胞增殖能力均無明顯的差別（p>0．05）。流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期結(jié)果顯示，MTSS1表達(dá)抑制細(xì)胞系7721-MTSS1-RNAi中G2M期細(xì)胞比例減少；相反，MTSS1高表達(dá)細(xì)胞系7703-MTSS1-3中G2M期細(xì)胞比例明顯增多。軟瓊脂克隆形成實(shí)驗檢測細(xì)胞克隆形成能力發(fā)現(xiàn)，MTSS1沉默細(xì)胞系7721-MTS

4、S1-RNAi比其對照細(xì)胞系7721-pSU的克隆形成能力增強(qiáng)；而在MTSS1高表達(dá)細(xì)胞系7703-MTSS1-3比其對照細(xì)胞系7703-PC克隆形成能力降低。平板克隆形成實(shí)驗結(jié)果與軟瓊脂克隆形成實(shí)驗結(jié)果一致。鼠成纖維細(xì)胞系中的研究結(jié)果，進(jìn)一步表明MTSS1的過表達(dá)未使NIH3T3細(xì)胞克隆形成能力增加，與對照細(xì)胞系相比，兩者的克隆形成率均小于1％。 結(jié)論：本研究得出以下結(jié)論：1、DNMT3B通過與MTSS1啟動子區(qū)特異性的結(jié)合，