腓骨肌萎縮癥家系的分子遺傳學(xué)研究和Fgf9S99N敲入小鼠模型的表型分析.pdf

1、上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院碩士研究生學(xué)位論文 ‐ 17 ‐ 第一部分 腓骨肌萎縮癥家系的分子遺傳學(xué)研究 前 言 遺傳性神經(jīng)病是一類影響周圍神經(jīng)系統(tǒng)的遺傳異質(zhì)性疾病， 該疾病最為普遍的 形 式 是 遺 傳 性 運(yùn) 動(dòng) 感 覺 神 經(jīng) 病 (HMSN) ， 又 叫 做 Charcot-Marie-Tooth Disease(CMT)，臨床上常稱為腓骨肌萎縮癥。CMT是一類高發(fā)病率的周圍神經(jīng)系統(tǒng)單基因遺傳病，可發(fā)生于世界范圍的各個(gè)種族之中，發(fā)病率約為

2、1/2500。遺傳方式主要為常染色體顯性遺傳(AD)， 也可見常染色體隱性遺傳(AR)及X連鎖顯性或隱性遺傳(XD或XR)，偶見散發(fā)病例。 CMT所表現(xiàn)出的第一個(gè)特征就是高足弓。隨著病情的發(fā)展，患者逐漸發(fā)展為弓形足及錘狀趾。腕部、手部肌肉萎縮十分常見。進(jìn)行性肌萎縮使患者出現(xiàn)行走及平衡的問題。為避免摔倒，患者會(huì)將膝部異常高抬而表現(xiàn)出跨越步態(tài)。一些患者的大腿肌肉也會(huì)出現(xiàn)無力，還有一些患者有扁平足。隨著疾病進(jìn)展，肌肉的無力和萎縮可能會(huì)發(fā)生在手

3、部，造成精細(xì)動(dòng)作的困難，如書寫等[1]。末端神經(jīng)功能的喪失還會(huì)導(dǎo)致感覺功能減退， 例如辨別冷熱的能力及觸覺下降。 癥狀往往在青少年或成年早期出現(xiàn)，但可能會(huì)延遲至中年。癥狀的嚴(yán)重程度在不同的患者，甚至家庭成員之間存在不同。 疼痛程度從輕微到嚴(yán)重不等， 一些患者可能需要依靠輔助設(shè)備來維持正常運(yùn)動(dòng)。 在極少數(shù)情況下， 病人會(huì)出現(xiàn)呼吸肌無力， 故CMT不被視為一種致命的疾病，患者往往擁有一個(gè)正常的預(yù)期壽命。 1886年Charcot、 Mari

4、e和Tooth同時(shí)報(bào)道了患有神經(jīng)綜合癥——腓骨肌萎縮癥的遺傳家系，這是CMT第一次被公開報(bào)道。1968年Dyck和Lambert第一次運(yùn)用神經(jīng)電生理的檢查觀測到神經(jīng)傳導(dǎo)速度在有些CMT家系中顯著降低，而在另外一些家系中卻是正常的，于是這些研究者根據(jù)CMT的遺傳方式、臨床癥狀、電生理及病理表現(xiàn)，將其主要分為兩型。他們引入了“遺傳性的運(yùn)動(dòng)感覺神經(jīng)病（HMSN） ”的概念， 并將顯性遺傳且神經(jīng)傳導(dǎo)速度降低的CMT稱為HMSNI型(或上海交通大

5、學(xué)醫(yī)學(xué)院碩士研究生學(xué)位論文 ‐ 19 ‐ 等問題。CMT2D病人常有感覺神經(jīng)病變，一些病人僅有運(yùn)動(dòng)神經(jīng)癥狀。 本課題組2009年7月在山東高密、 膠州、 昌邑等地采集到一個(gè)有6代人組成的常染色體顯性遺傳的CMT大家系。根據(jù)先證者及其他7名患者臨床表現(xiàn)及先證者肌電圖檢查情況，可以確定該家系為CMT2型。隨后，對(duì)該家系的全基因組掃描和連鎖分析顯示，致病基因定位于10p13-14，最大Lod值位于D10S506附近，為4.56。該位點(diǎn)與以往已

6、報(bào)道的CMT2型致病基因位點(diǎn)無關(guān)，與已報(bào)道的10號(hào)染色體上能引起CMT1D和CMT4E的EGR2基因也相去甚遠(yuǎn)，因此，該家系極有可能為一例國際上尚未報(bào)道的新的CMT2型。同時(shí)，本課題組采用候選基因法對(duì)該區(qū)域中的可疑基因進(jìn)行了測序分析， 結(jié)果發(fā)現(xiàn)位于第10號(hào)染色體的DHTKD1基因存在一個(gè)無義突變（X185Y） 。細(xì)胞水平的研究初步證實(shí)DHTKD1基因突變與該家系有關(guān)。 1 實(shí)驗(yàn)材料 1.1 研究對(duì)象 我們研究了一個(gè) 6 代常染色體顯性遺