超順磁性氧化鐵與熒光染料聯(lián)合標(biāo)記骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞及生物學(xué)特性檢測.pdf

1、目的:骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)已經(jīng)成為組織工程中重要的的種子細(xì)胞,在多種疾病的臨床治療中具有廣闊的應(yīng)用前景。而若想深入研究BMSCs的存活、增殖、分化及在體內(nèi)的遷移、歸巢情況,首先需要解決如何高效、安全地標(biāo)記BMSCs的問題。本文通過觀察SPIO、DAPI和CM-Dil對家兔BMSCs的聯(lián)合標(biāo)記效果及其對細(xì)胞存活、增殖以及分化的影響,為BMSCs的活體示蹤研究奠

2、定理論及實驗基礎(chǔ)。
　　 方法:分離培養(yǎng)家兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,用SPIO、DAPI和CM-Dil聯(lián)合標(biāo)記后,采用普魯士藍(lán)染色法檢測SPIO標(biāo)記率,熒光顯微鏡檢測熒光標(biāo)記率,透射電子顯微鏡觀察細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)及SPIO在細(xì)胞內(nèi)的分布,臺盼藍(lán)拒染法檢測細(xì)胞活力,MTT法檢測細(xì)胞增殖力,并使用地塞米松、胰島素、3-異丁基一1一甲基黃嘌呤、吲哚美辛體外誘導(dǎo)標(biāo)記細(xì)胞向脂肪細(xì)胞分化并用透射電子顯微鏡鑒定誘導(dǎo)后細(xì)胞,使用5一氮雜胞苷體外誘導(dǎo)標(biāo)記

3、細(xì)胞向心肌細(xì)胞分化并用免疫熒光鑒定誘導(dǎo)后細(xì)胞。
　　 結(jié)果:SPIO、DAPI和CM-Dil在體外對家兔BMSCs的聯(lián)合標(biāo)記率幾乎達(dá)100％;透射電鏡下可見電子密度高的SPIO顆粒主要分布于溶酶體、線粒體內(nèi)部及胞內(nèi)其他膜性結(jié)構(gòu)上,細(xì)胞核內(nèi)未見分布,且聯(lián)合標(biāo)記BMSCs的超微結(jié)構(gòu)顯示清晰、形態(tài)保存良好;臺盼藍(lán)拒染法顯示聯(lián)合標(biāo)記BMSCs組的細(xì)胞活力與未標(biāo)記BMSCs組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05);MTT法檢測發(fā)現(xiàn)聯(lián)合標(biāo)記B