NK細胞活化性受體配體在結(jié)腸癌細胞的表達與NK細胞殺傷敏感性的關系.pdf

1、目的：
　　1.研究NK細胞活化性受體配體CD155、CD112及MICA/B在結(jié)腸癌細胞系的表達情況，并嘗試聯(lián)合應用不同細胞因子上調(diào)相關配體表達。
　　2.觀察新鮮結(jié)腸癌組織中CD155、CD112及MICA/B的表達情況。
　　3.NK細胞殺傷結(jié)腸癌細胞實驗。
　　4.NK細胞殺傷結(jié)腸癌細胞機制研究。
　　方法：
　　1.結(jié)腸癌細胞系Colo205、SW116及SW480培養(yǎng)于含10％胎牛血清的R

2、PMI1640培養(yǎng)基中，EDTA常規(guī)傳代，取對數(shù)生長期細胞進行活細胞免疫熒光染色，F(xiàn)CM檢測CD155、CD112及MICA/B的表達情況。
　　2.取手術切除的新鮮結(jié)腸癌組織，OCT包埋，液氮凍存，-20℃切片，應用免疫組化法檢測新鮮結(jié)腸癌組織CD155、CD112及MICA/B的表達情況。
　　3.NK92細胞培養(yǎng)于含12.5％胎牛血清及12.5％馬血清的αDMEM培養(yǎng)基中。將NK92細胞作為效應細胞，三種結(jié)腸癌細胞系作

3、為靶細胞，按照效靶比5：1調(diào)整細胞濃度后，采用CFSE法檢測NK細胞的殺傷水平。
　　4.NK細胞殺傷結(jié)腸癌細胞的機制研究。取生長狀態(tài)良好的對數(shù)生長期NK92細胞以及三種結(jié)腸癌細胞進行實驗，實驗分為：NK細胞組（未經(jīng)任何誘導活化）、NK細胞＋Colo205組、NK細胞＋SW116組、NK細胞＋SW480組,在各組中自實驗開始即加入CD107a-PE-Cy5單抗，以及同型無關IgG1-PE-Cy5對照單抗，在37℃，5％CO2環(huán)境下

4、孵育6小時，充分洗滌2次后固定待檢，對比觀察未經(jīng)誘導的NK細胞與經(jīng)過不同細胞系誘導活化后的NK細胞脫顆粒情況之間的差異。
　　結(jié)果：
　　1.CD155在Colo205、SW116和SW480三種結(jié)腸癌細胞系的表達分別為：79.3％、95.1％及92.7％；CD112在Colo205、SW116和SW480三種結(jié)腸癌細胞系的表達分別為：99.3％、98.7％及47.1％；MICA/B在Colo205、SW116和SW480三

5、種結(jié)腸癌細胞系的表達分別為：4.8％、29.7％及85.5％。
　　2.共檢測12例新鮮結(jié)腸癌組織，CD155陽性表達6例（50％）其中強陽性3例（25％）；CD112陽性表達5例（41.7％）其中強陽性1例（8.3％）；MICA/B陽性表達3例（25％），其中強陽性1例（8.3％）。
　　3.CFSE法測得NK92細胞對Colo205、SW116和SW480三種細胞系的殺傷比率分別為：54.6％、52.6％、47.1％。<

6、br>　　4.NK細胞組CD107a表達率為41％；NK細胞＋Colo205組CD107a表達率為68.4％；NK細胞＋SW116組CD107a表達率為93.5％；NK細胞＋SW480組CD107a表達率為97.1％。
　　結(jié)論：
　　1.NK細胞活化性受體配體CD155、CD112及MICA/B在三種結(jié)腸癌細胞系的表達率較高，其中CD226的配體CD155/CD112在結(jié)腸癌細胞的表達率較NKG2D的配體MICA/B顯著高

7、。
　　2.新鮮分離的結(jié)腸癌細胞中，均查見三種配體的表達，與細胞實驗的結(jié)果基本一致，其中CD155/CD112在結(jié)腸癌細胞的表達率較MICA/B顯著高。
　　3.CFSE法測得NK92細胞對三種結(jié)腸癌細胞的殺傷率較高，提示了NK細胞可能是通過其膜表面活化性受體CD226及NKG2D與相應受體結(jié)合后活化，從而發(fā)揮殺傷結(jié)腸癌細胞的作用。
　　4.NK細胞在殺傷結(jié)腸癌細胞時，其CD107a的表達率明顯升高，提示NK細胞可能主