MicroRNA-376c靶向調(diào)控TGFA抑制骨肉瘤細(xì)胞增殖與轉(zhuǎn)移的研究.pdf

1、目的:
　　為miR-376c可以通過靶向調(diào)控TGFA抑制骨肉瘤細(xì)胞增殖與轉(zhuǎn)移提供證據(jù)。
　　方法:
　　1、臨床選取13例骨肉瘤組織標(biāo)本及配對正常骨骼肌組織標(biāo)本;選取人正常成骨細(xì)胞為對照，選取三株骨肉瘤細(xì)胞作為實驗組，QPCR技術(shù)檢測骨肉瘤組織與細(xì)胞中miR-376c與TGFAmRNA的表達差異。
　　2、利用miR-376c模擬物轉(zhuǎn)染骨肉瘤Saos-2細(xì)胞，Westernblot檢測TGFA和EGFR的表達，

2、接著過表達TGFA，回復(fù)miR-376c抑制TGFA和EGFR表達的效應(yīng)。
　　3、利用雙熒光素酶報告基因進一步驗證miR-376c對TGFA的靶向調(diào)控作用。
　　4、構(gòu)建miR-376c慢病毒載體，感染Saos-2細(xì)胞，用CCK8和Transwell方法檢測miR-376c對Saos-2細(xì)胞增殖和侵襲能力的影響，接著過表達TGFA，回復(fù)miR-376c對Saos-2細(xì)胞的生物學(xué)效應(yīng)。
　　結(jié)果:
　　1、組織水

3、平QPCR結(jié)果顯示，miR-376c在骨肉瘤組織中特異低表達，TGFA在骨肉瘤組織中特異高表達，且兩者具有很好的負(fù)相關(guān)性;細(xì)胞水平QPCR結(jié)果顯示，miR-376c在骨肉瘤細(xì)胞中特異低表達，TGFA在骨肉瘤細(xì)胞中特異高表達，與組織水平表達趨勢一致。
　　2、miR-376c模擬物轉(zhuǎn)染Saos-2細(xì)胞，miR-376c過表達，同時TGFA和EGFR表達受到顯著抑制;當(dāng)TGFA過表達后，可回復(fù)miR-376c抑制效應(yīng)。
　　3、

4、成功構(gòu)建miR-376c慢病毒載體，感染Saos-2細(xì)胞，GFP熒光圖片顯示，感染效率在8()上。細(xì)胞功能學(xué)結(jié)果顯示miR-376c過表達可顯著抑制Saos-2細(xì)胞增殖能力和侵襲能力，當(dāng)TGFA過表達后，可回復(fù)miR-376c對Saos-2細(xì)胞的功能學(xué)效應(yīng)。
　　結(jié)論:
　　1、miR-376c與TGFA表達在骨肉瘤組織和細(xì)胞水平均成負(fù)相關(guān)關(guān)系。
　　2、miR-376c通過靶向結(jié)合TGFA3'-UTR上預(yù)測的miR-