miR-21對(duì)宮頸癌HeLa細(xì)胞生物學(xué)特性的影響.pdf

1、目的：
　　 研究miR-21對(duì)HeLa細(xì)胞的增殖、遷移及侵襲能力等生物學(xué)特性的影響，為宮頸癌的基因治療及預(yù)后評(píng)估提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　 方法：
　　 將宮頸癌HeLa細(xì)胞分為miR-21上調(diào)組、miR-21下調(diào)組、各自陰性對(duì)照組及空白對(duì)照組。利用脂質(zhì)體(LipofectamineTM2000)介導(dǎo)法，miR-21上調(diào)組細(xì)胞轉(zhuǎn)染Pre-miRTM miR-21 Precursor Molecule，miR-21下調(diào)

2、組細(xì)胞轉(zhuǎn)染Anti-miRTMmiR-21 Inhibitor(anti-miR-21 oligonucleotides，AMOs)，陰性對(duì)照組細(xì)胞分別轉(zhuǎn)染miRNA前體陰性對(duì)照及miRNA抑制劑陰性對(duì)照，空白對(duì)照組未轉(zhuǎn)染任何miRNA分子。
　　 實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)轉(zhuǎn)染后各組細(xì)胞中miR-21的表達(dá)水平，四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)法檢測(cè)轉(zhuǎn)染后各組細(xì)胞的增殖能力，細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)轉(zhuǎn)染后各組細(xì)胞的遷移能力，Transwell

3、小室法檢測(cè)轉(zhuǎn)染后各組細(xì)胞的侵襲能力。
　　 結(jié)果：
　　 1、實(shí)時(shí)熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：miR-21前體作用HeLa細(xì)胞后，miR-21上調(diào)組與對(duì)照組相比目的基因miR-21的表達(dá)水平明顯上調(diào)(P＜0.01)；miR-21抑制劑作用細(xì)胞后，miR-21下調(diào)組與對(duì)照組相比目的基因miR-21的表達(dá)水平明顯下調(diào)(P＜0.01)。
　　 2、MTT增殖實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：轉(zhuǎn)染miR-21前體48h后，與對(duì)照組相比HeL

4、a細(xì)胞的相對(duì)增殖活性增高了15％-17％(P＜0.05)；轉(zhuǎn)染miR-21抑制劑48h后，與對(duì)照組相比HeLa細(xì)胞的相對(duì)增殖活性降低了13％-20％(P＜0.05)。
　　 3、細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染miR-21前體48-72h后，穿越劃痕區(qū)的細(xì)胞數(shù)與對(duì)照組相比明顯增多，細(xì)胞遷移能力較強(qiáng)；轉(zhuǎn)染miR-21抑制劑48-72h后，穿越劃痕區(qū)的細(xì)胞數(shù)與對(duì)照組相比減少，提示細(xì)胞遷移能力較弱。
　　 4、Transwell侵襲

5、實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：miR-21上調(diào)組穿膜細(xì)胞數(shù)為216±24；miR-21下調(diào)組穿膜細(xì)胞數(shù)為53±6；miRNA前體陰性對(duì)照組穿膜細(xì)胞數(shù)為122±15；miRNA抑制劑陰性對(duì)照組穿膜細(xì)胞數(shù)為115±10；正常對(duì)照組穿膜細(xì)胞數(shù)為115±14。miR-21上調(diào)組與對(duì)照組比較，穿膜細(xì)胞數(shù)明顯增多，差異具有顯著性(P＜0.01)，而miR-21下調(diào)組與對(duì)照組比較，穿膜細(xì)胞數(shù)明顯減少，差異具有顯著性(P＜0.01)。
　　 結(jié)論：