大蒜素治療實(shí)驗(yàn)大鼠卡氏肺孢子蟲肺炎的研究.pdf

1、目的：卡氏肺孢子蟲肺炎(Pneumocystiscariniipneumonia，PCP)是由卡氏肺孢子蟲(Pneumocystiscarinii,Pc)寄生于肺部引起的一種嚴(yán)重的致命性肺炎，也是艾滋病(AIDS)等各類先天或后天免疫機(jī)能低下患者常見的并發(fā)癥和主要死亡原因。目前，國內(nèi)外主要以戊烷脒或復(fù)方新諾明治療本病，但都因存在嚴(yán)重的毒副作用，使其應(yīng)用受到了限制。大蒜素是百合科多年生宿根草本植物大蒜提取物，主要有效成分為三硫二丙烯(Tr

2、isulfide.di-2-propnyl)，據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道對(duì)多種細(xì)菌、真菌及原蟲均有一定的殺滅作用，還具有提高宿主免疫力之功效，但對(duì)卡氏肺孢子蟲肺炎是否具有治療效果尚未見報(bào)道。本研究應(yīng)用地塞米松連續(xù)肌肉注射Wistar大鼠建立肺孢子蟲肺炎(PCP)動(dòng)物模型，用大蒜素治療實(shí)驗(yàn)大鼠，通過各組大鼠肺重、肺重/體重比值、肺印片中每100個(gè)油鏡視野肺孢子蟲包囊均數(shù)、肺組織病理學(xué)改變等指標(biāo)考核療效，研究大蒜素對(duì)大鼠卡氏肺孢子蟲肺炎的治療效果；通過光鏡

3、下、電鏡下觀察各組大鼠肺組織中肺孢子蟲包囊形態(tài)結(jié)構(gòu)改變，探討大蒜素抗卡氏肺孢子蟲作用機(jī)制；同時(shí)還觀察了卡氏肺孢子蟲包囊在PCP大鼠不同5個(gè)肺葉中的分布，為卡氏肺孢子蟲感染病原學(xué)診斷提供基礎(chǔ)資料。 方法：正常雌性Wistar大鼠40只，體重180～275g。按文獻(xiàn)報(bào)告方法建立大鼠肺孢子蟲肺炎(PCP)動(dòng)物模型。然后將PCP大鼠隨機(jī)分成3組：大蒜素實(shí)驗(yàn)治療組(A組)、復(fù)方新諾明治療對(duì)照組(B組)和PCP模型對(duì)照組(C組)。A組給予大

4、蒜素治療，劑量10mg/kg，1次/d，連續(xù)7d，后腿肌肉深部注射；B組給予復(fù)方新諾明治療，劑量250mg/kg·d，分2次灌胃給藥，連給7d；C組不給予任何藥物治療。在治療過程中觀察各組大鼠攝食、活動(dòng)、毛發(fā)、呼吸等變化；在治療開始和治療結(jié)束時(shí)每只大鼠各稱重1次，計(jì)算每組大鼠治療前后體重變化均數(shù)；治療結(jié)束3天后，剖殺各組大鼠，肉眼觀察大鼠肺臟表面及切面有無病變；然后稱全肺濕重，計(jì)算每組大鼠肺重、肺重/體重均數(shù)；制作每只大鼠4個(gè)主要肺葉肺

5、組織印片，固定染色后，油鏡下觀察肺孢子蟲包囊形態(tài)，計(jì)數(shù)100個(gè)油鏡視野肺孢子蟲包囊總數(shù)，計(jì)算每組大鼠100個(gè)油鏡視野包囊均數(shù)；常規(guī)制作每只大鼠肺組織病理切片、肺組織超薄切片，光學(xué)顯微鏡下、電子顯微鏡下觀察肺組織病理改變、卡氏肺孢子蟲包囊形態(tài)改變。 對(duì)于PCP模型組大鼠，制作不同5個(gè)肺葉(右肺前、中、副、后葉，左肺葉)肺組織印片各1張，固定染色后，計(jì)數(shù)100個(gè)油鏡視野肺孢子蟲包囊總數(shù)，計(jì)算不同5個(gè)肺葉100個(gè)油鏡視野包囊均數(shù)。

6、 結(jié)果： 1大鼠一般狀況在治療前，三組大鼠普遍存在少動(dòng)厭食、體毛蓬松、毛色灰暗、呼吸困難等表現(xiàn)。經(jīng)大蒜素治療、復(fù)方新諾明治療后，兩組大鼠食欲增加、毛色光澤，呼吸困難減輕，而對(duì)照組無明顯改善。 2大鼠體重變化，肺重、肺重/體重比各組大鼠在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)的平均體重均有所下降，其中PCP模型對(duì)照組下降最明顯，但經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，差異無顯著性(P＞0.05)。大蒜素治療組、復(fù)方新諾明治療對(duì)照組、PCP模型對(duì)照組大鼠平均肺重、肺重/體

7、重比分別為1.73±0.17、0.84±0.12；1.73±1.06、0.84±0.15；2.31±0.35、1.25±0.35，對(duì)以上數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析(方差檢驗(yàn))，PCP模型對(duì)照組最高，且與其他兩組比較差異均有顯著性(P＜0.05)。 3肺印片中肺孢子蟲包囊形態(tài)觀察PCP模型對(duì)照組觀察到的包囊，大多為正常形態(tài)的成熟包囊，形態(tài)不典型包囊(主要是未成熟包囊)僅為19.60％。大蒜素治療組觀察到的包囊中，形態(tài)不典型包囊為47.81

8、％，表現(xiàn)在內(nèi)部結(jié)構(gòu)不清晰，空泡較多，囊內(nèi)小體細(xì)胞核碎片狀。復(fù)方新諾明治療組觀察到包囊中，形態(tài)不典型者占53.28％，包囊變化與大蒜素治療組相似。兩個(gè)治療組不典型包囊比率顯著高于對(duì)照組，差異具有顯著性(P＜0.05)。 4肺印片中肺孢子蟲包囊計(jì)數(shù)大蒜素治療組、復(fù)方新諾明治療對(duì)照組、PCP模型對(duì)照組大鼠肺印片中每100個(gè)油鏡視野肺孢子蟲包囊均數(shù)分別為21.39±20.55、22.37±30.03、57.70±20.24，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

9、，大蒜素治療組和復(fù)方新諾明治療組每100油鏡視野肺孢子蟲包囊均數(shù)均明顯低于PCP模型對(duì)照組，差異有顯著性(P＜0.01)；大蒜素治療組包囊減少率為62.93％，略高于復(fù)方新諾明治療組61.23％，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 5肺臟大體觀察PCP模型對(duì)照組大鼠肺臟腫脹增大，表面粗糙不平，質(zhì)地較硬，灰褐色，肺表面及切面有米粒大小灰白色結(jié)節(jié)樣病灶，擠壓后切面有粘稠樣滲出物溢出；大蒜素治療組大鼠肺臟腫脹較輕，質(zhì)地較軟，暗紅色，表面及切面結(jié)節(jié)樣病灶

10、明顯減少；復(fù)方新諾明治療組大鼠肺臟變化與大蒜素治療組接近，兩組區(qū)別不明顯。 6肺組織病理學(xué)觀察PCP模型對(duì)照組呈現(xiàn)典型間質(zhì)性肺炎病理改變，即肺泡腔變小，肺泡上皮增生，間隔增寬，間質(zhì)內(nèi)有以淋巴細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞為主的細(xì)胞浸潤，肺泡腔內(nèi)充滿淡紅色泡沫樣滲出物。經(jīng)大蒜素治療組大鼠肺部炎癥明顯較輕，與復(fù)方新諾明治療組接近，即肺泡腔大小不一，肺泡間隔較薄，肺泡腔內(nèi)炎性滲出物較少或無。 7肺組織、肺孢子蟲超微結(jié)構(gòu)觀察PCP模型對(duì)照組

11、大鼠肺組織炎性病變明顯，肺泡上皮和肺泡腔內(nèi)肺孢子蟲包囊和滋養(yǎng)體較多，個(gè)別肺泡腔內(nèi)包囊和滋養(yǎng)體成堆。觀察到的包囊、滋養(yǎng)體形態(tài)結(jié)構(gòu)正常、完整。經(jīng)大蒜素治療組大鼠肺組織病變明顯減輕，觀察到的包囊形態(tài)結(jié)構(gòu)發(fā)生明顯改變，表現(xiàn)在包囊內(nèi)出現(xiàn)空泡，大小不等，個(gè)體較大的空泡將殘留胞質(zhì)及細(xì)胞器擠到包囊的邊緣；囊壁輕度增厚，偶見破裂，在囊壁破裂附近出現(xiàn)嗜鋨性較強(qiáng)的髓樣結(jié)構(gòu)；個(gè)別受損嚴(yán)重的包囊內(nèi)蟲體空化，內(nèi)部結(jié)構(gòu)消失。沒有觀察到滋養(yǎng)體。復(fù)方新諾明治療組觀察結(jié)果

12、與大蒜素治療組相似。 8PCP模型組大鼠不同5個(gè)肺葉印片中肺孢子蟲包囊計(jì)數(shù)在大鼠右肺副葉，左肺葉，右肺前葉，右肺中葉100個(gè)油鏡視野肺孢子蟲包囊數(shù)量較多，依次為63.78±28.23、55.78±16.81、55.67±19.67、51.33±28.77，4個(gè)肺葉間差異均無顯著性(P＞0.05)；右肺后葉最低，為25.89±15.36，與其他4個(gè)肺葉相比，差異均具顯著性(P＜0.05)。 結(jié)論： 1大蒜素治療后大

13、鼠一般狀況(飲食、毛色、活動(dòng)、呼吸等)有所改善；大鼠平均肺重、肺重/體重比值降低；光鏡和電鏡觀察，肺組織炎性病變減輕，肺泡間隔變薄，肺泡腔內(nèi)炎性滲出物減少或消失，說明大蒜素對(duì)實(shí)驗(yàn)大鼠卡氏肺孢子蟲肺炎有一定的治療作用，以上考核指標(biāo)與復(fù)方新諾明治療組比較，差異無顯著性，提示大蒜素治療效果接近復(fù)方新諾明。 2經(jīng)大蒜素治療后大鼠肺印片和超薄切片中肺孢子蟲包囊數(shù)量較少，明顯低于未用藥治療的模型對(duì)照組，說明大蒜素可減少PCP大鼠肺組織內(nèi)的包

14、囊數(shù)量。 3光鏡和電鏡觀察，大蒜素治療后肺孢子蟲包囊形態(tài)結(jié)構(gòu)發(fā)生一定改變，表現(xiàn)在包囊內(nèi)出現(xiàn)空泡，囊內(nèi)小體溶解破壞等，提示大蒜素對(duì)大鼠卡氏肺孢子蟲可能具有直接破壞作用；電鏡下觀察，經(jīng)大蒜素治療后部分包囊囊壁輕度增厚，偶見破裂，在囊壁破裂附近出現(xiàn)嗜鋨性較強(qiáng)的髓樣結(jié)構(gòu)，提示大蒜素可能作用于卡氏肺孢子蟲的膜系結(jié)構(gòu)。 4卡氏肺孢子蟲包囊在PCP大鼠不同5個(gè)肺葉的分布，以右肺副葉，左肺葉，右肺前葉，右肺中葉感染數(shù)量較多，右肺后葉感染