男性原發(fā)不育患者Y染色體微缺失研究及細胞遺傳學分析.pdf

1、研究目的：
　　通過對男性原發(fā)不育患者的染色體核型以及Y染色體基因微缺失的分析研究，尋找男性原發(fā)不育的遺傳學依據(jù)，以及中國男性原發(fā)不育患者AZF基因突變的熱點，為臨床進行男性不育的診斷、治療以及輔助生殖技術提供相應的理論依據(jù)和技術支持。
　　方法和材料：
　　以2008～2011年于天津市中心婦產(chǎn)科醫(yī)院就診的無精子癥或是少精子癥患者83例為研究對象。所有患者均按照世界衛(wèi)生組織(WHO)推薦的方法和診斷標準加以確診，并排

2、除內分泌失調、輸精管阻塞、隱睪等因素。對所有研究對象進行外周血染色體核型分析，將83例患者分成染色體核型正常組和染色體核型異常組。
　　抽取患者2ml EDTA抗凝外周血，采用酚一氯仿的方法提取DNA并保存于-20℃?zhèn)溆?。與大多數(shù)研究通常選用AZF區(qū)6-12個位點進行檢測不同，在本研究中選取15個位點進行研究，包括AZFα區(qū)的sY82、sY84、sY86，AZFb區(qū)的sY124、sY127、sY128、sY133、sY134、sY

3、143，AZFc區(qū)的sY239、sY242、sY254、sY255，AZFd區(qū)的sY145、sY152。將這15個位點組成4套多重PCR系統(tǒng)，分別為系統(tǒng)Ⅰ：SRY、sY254、sY143、sY242、sY255，系統(tǒng)Ⅱ：SRY、sY84、sY239、sY152，系統(tǒng)Ⅲ：SRY、sY86、sY127、sY145、sY124，系統(tǒng)Ⅳ：SRY、sY134、sY82、sY128、sY133。為排除假陽性的結果，在每套系統(tǒng)中以SRY基因作為內對照

4、，同時以空白和健康男性作外對照。
　　結果：
　　1.DNA提取的質量用酚-氯仿的方法提取所有研究對象的外周血DNA，DNA的濃度在44.61ng/μl～161.2 ng/μl(96.2±8.6ng/μl)，A260/280在1.65～1.85之間。
　　2.13例異常染色體核型分析在83例患者中有13例患者存在染色體核型的異常，其中7例為無精子癥患者，核型分別為：3例47，XXY；1例45，XY，rob(13；21)

5、(p10；q10)；1例45，XY，rob(14；15)del(Y)(pter→q11.2)；1例48，XXYY；1例46，XY，inv(9)(p11q12)，21pss，15p+。6例為少精子癥患者，核型分別為：2例47，XXY；1例46，XY，del(Y)(q11.23)；1例46，XY，t(6:22)(q15；p11)；1例46，XY，t(15，22)(q11.2，q11.2)；還有1例患者染色體核型為46，XY，t(4；18)(

6、q35；q11.2)。
　　3.微缺失發(fā)生的區(qū)域在染色體核型正常的70例無精子癥及少精子癥患者中共有8例AZF的微缺失，總缺失率為11.4％(8/70)。其中無精子癥患者共32例，有4例有AZF的微缺失，缺失率為12.5％(4/32)；少精子癥患者共38例，有4例有AZF微缺失，缺失率為10.5％(4/38)。在有AZF微缺失的8例患者中，5例有AZFc的微缺失，4例有AZFb的微缺失，3例有AZFα的微缺失，1例有AZFd的微缺

7、失。
　　4.染色體正?；颊呶⑷笔Оl(fā)生的位點8例有微缺失的病例中包含了14個位點的缺失，其中1例是AZFb+AZFc+AZFd的微缺失，缺失位點包括sY124、sY127、sY128、sY133、sY134、sY143、sY145、sY152、sY239、sY242、sY254、sY255，占缺失病例的12.5％(1/8)；1例是AZFb+4ZFc的微缺失，缺失位點為sY254、sY134，占缺失病例的12.5％(1/8)；1例是

8、AZFα+AZFb+AZFc的微缺失，缺失位點為sY254、sY134、sY82，占缺失病例的12.5％(1/8)；2例是AZFα的微缺失，缺失位點為sY84，占缺失病例的25.0％(2/8)；1例是AZFb的微缺失，缺失位點為sY127，占缺失病例的12.5％(1/8)；2例是AZFc的微缺失，缺失位點為sY254，占缺失病例的25.0％(2/8)。在8例AZF微缺失的患者中未檢測到sY86的缺失。
　　5.對1例46，XY，Y

9、qh-的檢測該患者的染色體核型為46，XY，del(Y)(q11.23)，臨床表現(xiàn)為少精子癥，通過Y染色體基因微缺失的檢測發(fā)現(xiàn)該患者存在sY254(AZFc)和sY134(AZFb)的缺失。
　　結論：
　　(1)染色體異常是引起男性原發(fā)不育的一個重要因素，對不育男性常規(guī)進行外周血染色體核型分析既可以幫助病人尋找不育的遺傳因素，也可以減少患者將變異染色體傳給后代的幾率，降低染色體異?；純撼錾臋C率。
　　(2)在本研究