RNA干擾CXCR4和CXCR7對(duì)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞生物學(xué)功能的影響.pdf

1、目的：本研究通過(guò)利用siRNA（small interference RNA）沉默趨化因子受體CXCR4和CXCR7基因的表達(dá)，探討其對(duì)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞株生物學(xué)功能的影響。
　　方法：①通過(guò)半定量RT-PCR及western blotting檢測(cè)人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞株中趨化因子受體CXCR4/CXCR7及其配體CXCL12的表達(dá)；
　　②針對(duì)人 CXCR4和CXCR7基因設(shè)計(jì)合成靶向特異性 siRNA（小分子干擾RNA），利用Li

2、pofectamineTM2000脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染劑瞬時(shí)轉(zhuǎn)染至人子宮內(nèi)膜癌Ishikawa和HEC-1-A細(xì)胞株，應(yīng)用RT-PCR及western blotting驗(yàn)證干擾效果；
　?、弁ㄟ^(guò)CCK-8、流式細(xì)胞術(shù)和Transwell法分別檢測(cè)CXCR4和CXCR7基因沉默對(duì)Ishikawa和HEC-1-A增殖、細(xì)胞周期和侵襲能力的影響。
　　結(jié)果：①Ishikawa和HEC-1-A細(xì)胞株均見(jiàn)CXCR4、CXCR7和CXCL12 m

3、RNA和蛋白的表達(dá)；
　?、趯⒀芯亢铣傻腃XCR4-siRNA、CXCR7-siRNA及CXCR4-siRNA/CXCR7-siRNA轉(zhuǎn)染至 Ishikawa和HEC-1-A細(xì)胞株后，均可分別并成功干擾 CXCR4、CXCR7、CXCR4/CXCR7基因或蛋白的表達(dá)，通過(guò)半定量RT-PCR和western blotting檢測(cè)分析發(fā)現(xiàn)干擾后細(xì)胞mRNA和蛋白的表達(dá)量明顯下調(diào)；
　?、墼贑CK-8、Transwell及流式細(xì)胞

4、術(shù)實(shí)驗(yàn)中，CXCR4和CXCR7的單獨(dú)沉默和聯(lián)合沉默均可導(dǎo)致Ishikawa和HEC-1-A細(xì)胞株增殖能力和趨化侵襲能力明顯降低，同時(shí)引發(fā)Ishikawa和HEC-1-A細(xì)胞周期出現(xiàn)S期阻滯。
　　結(jié)論：通過(guò)應(yīng)用siRNA靶向沉默CXCR4和CXCR7后，子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞株Ishikawa和HEC-1-A的增殖和侵襲能力均降低，并在細(xì)胞周期中出現(xiàn)S期阻滯。結(jié)果提示趨化因子受體CXCR4和CXCR7在Ishikawa和HEC-1-A細(xì)