沉默維生素D結(jié)合蛋白基因?qū)Π螂装㏕24細(xì)胞生物學(xué)特性的影響.pdf

1、南方醫(yī)科大學(xué)2010級碩士學(xué)位論文沉默維生素D結(jié)合蛋白基因?qū)Π螂装㏕24細(xì)胞生物學(xué)特性的影響StudiesoftheinfluenceofT24bladdercancercell’Sbiologicabet晦viorbysilencingtheVitamine—Dbindingproteingene課題來源：自選學(xué)位申請人陳定南導(dǎo)師姓名譚萬龍教授專業(yè)名稱泌尿外科培養(yǎng)類型臨床型培養(yǎng)層次碩士研究生所在學(xué)院南方醫(yī)院2013年3月20日廣州摘要

2、的表達(dá)，特別是蛋白的表達(dá)，因而調(diào)控DNA的功能，在腫瘤的形成過程中越來越受到重視【l引。雖然在醫(yī)學(xué)上的提高和監(jiān)測膀胱癌的早期檢出率仍然是一個巨大的挑戰(zhàn)。而我們最近研究發(fā)現(xiàn)，維生素D結(jié)合蛋白(VitaminDBindingProtein，又稱為DBP或GC蛋白，以下簡稱GC蛋白)可以作為一個新的尿源性標(biāo)志物16J，在早期的膀胱尿路上皮癌的檢測和監(jiān)測中發(fā)揮重要的作用，并有可能成為將來早期診斷膀胱癌的重要方法。但維生素D結(jié)合蛋白在膀胱移行上皮

3、癌細(xì)胞中的作用尚未被闡明，所以有必要對該蛋白在膀胱癌細(xì)胞中發(fā)揮的作用作進一步的研究和探討。實驗?zāi)康模罕緦嶒炛荚?研究GC蛋白在膀胱癌T24細(xì)胞株與正常膀胱粘膜上皮細(xì)胞中表達(dá)的差異；2通過RNAi干擾的方法，沉默膀胱癌T24細(xì)胞GC基因，下調(diào)膀胱癌T24細(xì)胞GC蛋白的表達(dá)，并進一步研究其對膀胱癌T24細(xì)胞生物學(xué)特性的影響。方法：第一部分：1細(xì)胞培養(yǎng)：選取膀胱癌T24細(xì)胞株及正常膀胱粘膜上皮細(xì)胞作為對照組進行細(xì)胞培養(yǎng)，分為膀胱癌細(xì)胞組和正常

4、膀胱粘膜上皮細(xì)胞組。2分別對兩組細(xì)胞提取總蛋白，應(yīng)用免疫印跡法，經(jīng)過蛋白電泳，轉(zhuǎn)膜，封閉雜交及曝光檢測GC蛋白在膀胱癌T24細(xì)胞株中的表達(dá)與該蛋白在正常膀胱粘膜上皮細(xì)胞株中表達(dá)的差異。第二部分：1細(xì)胞培養(yǎng)：選取膀胱癌T24細(xì)胞株分為GCsiRNA組作為實驗組、陰性對照組、空白對照組共三組，其中GCsiRNA組應(yīng)用RNAi的方法，用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染siRNA干擾片段，沉默膀胱癌T24細(xì)胞維生素D結(jié)合蛋白基因(簡稱GC基因)的表達(dá)；陰性對照組用脂