樹突狀細胞聯(lián)合LAK細胞的生物學特性研究.pdf

1、目的 觀察淋巴因子激活的殺傷細胞(LAK)與同源樹突狀細胞(DC)共培養(yǎng)后DC-LAK細胞增殖活性、表型的變化，及其對肺癌細胞株的殺傷效應。 方法 采集12例健康成人自愿者的無菌靜脈血30毫升，密度梯度離心法分離出外周血單個核細胞(PB-MC)，用RPMI 1640培養(yǎng)液，置培養(yǎng)箱培養(yǎng)2小時，收集非貼壁細胞加入重組白細胞介素-2(rhlL-2)用于誘導培養(yǎng)LAK細胞，貼壁細胞中加入重組白細胞介素-4(rhlL-4

2、)、重組粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子(rhGM-CSF)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)誘導分化DC。倒置顯微鏡觀察細胞的形態(tài)和增殖情況。應用流式細胞儀(FCM)測定細胞表型上變化鑒定這兩種細胞。將培養(yǎng)到第七天的兩種細胞，分成三組：第一組：①腫瘤凍融抗原刺激的肺腺癌細胞A549(DC-A549-LAK)組；②腫瘤凍融抗原刺激的小細胞肺癌細胞NCI-H446(DC-NCI-H446-LAK)組，第二組：未加抗原刺激的DC-LAK組，第三組

3、：單純培養(yǎng)的LAK組(對照組)，繼續(xù)培養(yǎng)。倒置顯微鏡觀察每組細胞的增殖情況；用FCM測定細胞表型變化；利用四甲基偶氮唑藍(MTT)法檢測效應細胞在體外對人肺癌細胞株的殺傷活性。 結(jié)果 1．體外誘導單個核細胞培養(yǎng)中加入細胞因子后，誘導出具有典型形態(tài)和免疫表型的DC和LAK細胞。2．共培養(yǎng)后DC-LAK細胞的免疫表型CD3、CD8、CD3<'+>CD8<'+>、CD3<'+>CD56<'+>的表達增加和細胞增殖率增加。經(jīng)抗原

4、沖擊后的DC-A549-LAK組及DC-NCI-H446-LAK組的CD3表達分別為(59.17±3.92)％和(60.89±4.39)％，顯著高于對照組(38.34±4.57)％(p<0.05)；CD8細胞最高表達為(54.56±1.60)％和(54.12±3.06)％，對照組為(28.99±4.17)％，實驗組與對照組相比有顯著性意義(p<0.05)；CD<'3>+CD8<'+>最高表達為(52.04±3.92)％和(50.79±3

5、.54)％，對照組(26.17±5.72)％，兩者相比有顯著性意義(p<0.05)；CD3<'+>CD56<'+>最高表達(40.56±1.09)％和(41.25±2.35)％，對照組(23.15±3.11)％，實驗組與對照組相比有顯著性意義(p<0.05)；CD4變化不明顯。在共培養(yǎng)第16天細胞增殖倍數(shù)：DC-A549-LAK組、DC-NCI-H446-LAK組分別是誘導前的(96.42±2.98)倍和(97.28±3.96)倍，DC

6、-LAK組是(81.42±2.12)倍，LAK對照組為(42.23±3.14)倍，兩者在增殖倍率上有顯著意義(p<0.05)。3．MTT顯示共培養(yǎng)后的LAK細胞殺傷腫瘤細胞活性增強。DC-A549-LAK組對A549細胞的殺傷率為(86.92±7.78)％明顯高于LAK組的(56.97±9.30)％(P<0.05)，DC-NCI-H446-LAK組對NCI-H446細胞的殺傷率為(84.56±8.01)％，明顯高于LAK組的(46.28