miR-23a和miR-30a對炎性環(huán)境下成骨細(xì)胞生物學(xué)活性的影響研究.pdf

1、牙周炎是危害最廣泛的慢性炎性骨吸收性疾病。目前,臨床上治療牙周病的常用方法是基礎(chǔ)治療、藥物治療及手術(shù)治療等,但均難以獲得理想的牙周骨組織再生修復(fù)。骨代謝平衡是由成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞協(xié)同完成的。在炎性環(huán)境下,成骨細(xì)胞功能受抑是骨代謝失衡的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。有大量研究證實(shí)炎癥因子可通過不同信號通路調(diào)控成骨細(xì)胞分化,而miRNA的發(fā)現(xiàn)使研究目光著眼于轉(zhuǎn)錄后水平的調(diào)控。miRNA是一類進(jìn)化上高度保守的長度約22nt的內(nèi)源性小分子RNA,參與轉(zhuǎn)錄后水平的基

2、因調(diào)控。它與很多生命過程和某些疾病的發(fā)生發(fā)展均有緊密聯(lián)系。
　　目前研究認(rèn)為某些miRNA的表達(dá)改變與牙周炎的發(fā)生相關(guān)。此外,成骨細(xì)胞的分化過程也與miRNA有關(guān)。然而到目前為止,國內(nèi)外學(xué)者的研究只是停留于發(fā)現(xiàn)和報道參與調(diào)控牙周炎疾病發(fā)生發(fā)展的特定miRNA分子群;以及調(diào)控骨分化成熟的特定miRNA分子群。但對共同調(diào)節(jié)著牙周炎和骨分化的分子:miR-23a和miR-30a,以及它們對炎性微環(huán)境下成骨細(xì)胞生物學(xué)功能的調(diào)控作用和對牙周

3、炎性骨缺失發(fā)生機(jī)制的研究尚未見報道。基于以上研究背景,本研究通過建立大鼠牙周炎動物模型及LPS刺激成骨細(xì)胞模擬體外炎性微環(huán)境,探討在炎性環(huán)境中,miR-23a和miR-30a對骨吸收和成骨細(xì)胞功能的影響。繼而通過體外干預(yù)miR-23a和miR-30a的表達(dá)水平,我們檢測了它們在正常和炎癥環(huán)境下對成骨細(xì)胞的成骨能力和炎癥因子受體表達(dá)的影響。對這些分子的研究,有助于更加深入的了解牙周炎性骨缺失的分子機(jī)制,為臨床治療牙周炎骨缺失提供新的策略。

4、
　　研究目的：
　　(1)觀察研究大鼠牙周炎模型炎性牙齦、骨組織中miR-23a、-30a的表達(dá)改變,并模擬體外炎性微環(huán)境,觀察炎性環(huán)境下牙周膜細(xì)胞、成骨細(xì)胞內(nèi)miR-23a、-30a的表達(dá)情況。
　　(2)探討miR-23a、-30a對成骨細(xì)胞的分化及細(xì)胞炎性因子受體表達(dá)的影響。
　　(3)探討在炎性環(huán)境下,改變miR-23a、-30a的表達(dá)對成骨細(xì)胞的分化及細(xì)胞表面炎性因子受體表達(dá)的影響。
　　研究方

5、法：
　　(1)采用金屬絲結(jié)扎法建立大鼠牙周炎動物模型,結(jié)扎21天后處死動物收集結(jié)扎側(cè)和對照側(cè)牙齦及牙槽骨組織;以1μg/mlLPS刺激牙周膜細(xì)胞和成骨細(xì)胞以模擬炎性環(huán)境,利用Real-timePCR檢測組織、細(xì)胞內(nèi)miR-23a、-30a的表達(dá)。
　　(2)通過體外轉(zhuǎn)染miR-23a、-30a的模擬物和抑制物,實(shí)現(xiàn)miR-23a、-30a的過表達(dá)和低表達(dá)。用ALP染色、Real-timePCR檢測成骨細(xì)胞分化能力和炎性因子

6、的表達(dá)水平。
　　(3)在存在LPS的環(huán)境下,體外抑制miR-23a、-30a的表達(dá),Real-timePCR檢測miR-23a、-30a對成骨相關(guān)基因和炎性因子的表達(dá)水平的影響。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果：
　　(1)大鼠牙周炎牙齦組織、牙槽骨組織中miR-23a和miR-30a的表達(dá)水平明顯高于正常對照側(cè)。牙周膜細(xì)胞、成骨細(xì)胞經(jīng)1μg/mLLPS刺激24h后,miR-23a和miR-30a的表達(dá)水平均較對照組明顯增高,差異有統(tǒng)

7、計學(xué)意義(P<0.05)。
　　(2)過表達(dá)miR-23a和miR-30a后,ALP染色、Real-timePCR檢測成骨相關(guān)基因表達(dá)下降而炎性因子的表達(dá)升高。相反,抑制miR-23a和miR-30a的表達(dá)后,ALP染色、Real-timePCR檢測成骨相關(guān)基因表達(dá)上升而炎性因子的表達(dá)下降。
　　(3)LPS刺激成骨細(xì)胞后,成骨分化能力受抑制而炎性因子表達(dá)升高。在LPS刺激環(huán)境下,抑制miR-23a和miR-30a的表達(dá),礦