水產(chǎn)品中己烯雌酚殘留檢測(cè)方法學(xué)研究.pdf

1、己烯雌酚是一種作用較強(qiáng)的人工合成雌激素類似物，是我國(guó)水產(chǎn)養(yǎng)殖禁用藥物，殘留監(jiān)控重點(diǎn)藥物，因此，建立快速、準(zhǔn)確的水產(chǎn)品中己烯雌酚殘留檢測(cè)方法具有重要意義。本文對(duì)己烯雌酚的競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法及氣相色譜—質(zhì)譜法定性、定量檢測(cè)水產(chǎn)品中己烯雌酚殘留技術(shù)進(jìn)行了研究。 一、己烯雌酚ELISA檢測(cè)技術(shù)研究采用氯乙酸鈉法在DES半抗原中引入一元羧甲基，并對(duì)反應(yīng)產(chǎn)物進(jìn)行定性、定量分析，一元羧甲基DES純度達(dá)95％以上；用CDI法將一元羧甲基DES

2、和牛血清白蛋白合成DES-BSA抗原，DES與BSA偶聯(lián)比例為14∶1；5只新西蘭大耳兔用此抗原免疫5次后，抗血清經(jīng)(NH4)2S04沉淀和Sephedex-G-200層析后收集純化抗體，通過(guò)ELISA試驗(yàn)證明純化后的IgG效價(jià)達(dá)1∶30000；一元羧甲基己烯雌酚在碳化二亞胺的作用下與辣根過(guò)氧化物酶相偶聯(lián)，制備了辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記物DES-HRP，經(jīng)對(duì)酶標(biāo)記物的酶活性、酶免疫活性鑒定，結(jié)果表明：制備的酶標(biāo)記物具有很好的酶活性和免疫活性，

3、經(jīng)過(guò)光譜分析，己烯雌酚與辣根過(guò)氧化物酶的偶合比例為10.92∶1，酶標(biāo)記物的最佳工作濃度為1/6400稀釋；用包被液將抗血清做1∶500稀釋，加入96孔酶標(biāo)板中，各孔依次加入20μLDES標(biāo)準(zhǔn)系列液和DES-HRP標(biāo)記物，最后加底物、終止液并讀數(shù)，建立DES的標(biāo)準(zhǔn)曲線。 通過(guò)對(duì)試驗(yàn)條件的優(yōu)化，初步建立了檢測(cè)DES殘留的競(jìng)爭(zhēng)ELISA法。該方法的線性范圍50-400ppt，變異系數(shù)為15.68％，具有一定的靈敏度，較好的穩(wěn)定性。

4、 二、GC-MS檢測(cè)水產(chǎn)品中己烯雌酚殘留技術(shù)研究采用基質(zhì)固相擴(kuò)散和固相萃取結(jié)合的方法提取水產(chǎn)品中殘留的己烯雌酚，經(jīng)凈化后，用BSTFA作為衍生化試劑衍生，氣相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用(選擇離子模式，選擇離子質(zhì)荷比為：383、397、412、413)對(duì)衍生物進(jìn)行定性、定量分析，建立了水產(chǎn)品中己烯雌酚殘留的氣相色譜—質(zhì)譜檢測(cè)方法，并對(duì)該方法進(jìn)行了驗(yàn)證。結(jié)果表明：該方法在5ng/ml-100ng/ml范圍內(nèi)線性良好，4.0μg/kg加標(biāo)濃度平均回