刺參體內(nèi)硒的分離測(cè)定及外源硒對(duì)其生物學(xué)指標(biāo)的影響.pdf

1、本文對(duì)刺參(Apostichopus japonicas)體內(nèi)無機(jī)硒及有機(jī)硒的分離提取工藝進(jìn)行了優(yōu)化，建立了無機(jī)硒和有機(jī)硒的分離方法，進(jìn)而進(jìn)行了不同地區(qū)刺參群體不同組織內(nèi)硒形態(tài)的初步分析，并研究了不同濃度的外源硒對(duì)刺參的生物學(xué)影響，為研發(fā)一種新型綠色水產(chǎn)動(dòng)物免疫增強(qiáng)劑以及獲得天然安全的富含有機(jī)硒的刺參提供理論依據(jù)。主要研究內(nèi)容包括：
　　一、無機(jī)硒和有機(jī)硒的分離方法的建立與優(yōu)化
　　硒具有提高人體免疫力，對(duì)有害物質(zhì)的解毒及抗

2、衰老作用，是人體所需要的重要微量營養(yǎng)元素之一。硒特殊的生理、生化功能不僅取決于其總濃度水平，而且同硒存在的化學(xué)形態(tài)以及不同化學(xué)形態(tài)下硒化物的濃度水平密切相關(guān)，無機(jī)硒的毒性遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于有機(jī)硒，因此采用準(zhǔn)確有效的測(cè)定總硒及無機(jī)硒含量的方法非常重要。
　　本文通過比較和實(shí)驗(yàn)，采用HCl水浴提取法、Tris-HCl-甘油提取法、透析袋透析法及超純水超聲破碎法四種方法進(jìn)行有機(jī)硒和無機(jī)硒分離，確定了超純水超聲破碎法浸提無機(jī)硒的效果最好。首次通過改

3、變超聲破碎的時(shí)間、設(shè)置不同的水浴時(shí)間及水浴溫度、改變環(huán)己烷萃取次數(shù)的技術(shù)參數(shù)，確立了從刺參樣品中提取硒的最優(yōu)條件，建立和優(yōu)化了無機(jī)硒與有機(jī)硒的分離方法，并對(duì)測(cè)定分析方法進(jìn)行了方法檢出限計(jì)算及回收率、精密度實(shí)驗(yàn)，在優(yōu)化的工作條件下，硒濃度為0~30μg/L，與熒光強(qiáng)度有良好的線性關(guān)系，線性方程為I=133.06*C+21.76，相關(guān)系數(shù)r=0.9998，最低檢出限為0.0005 ng/mL；樣品總硒的回收率達(dá)到95.43％～99.74%，

4、相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.48%～5.26%，無機(jī)硒的回收率達(dá)到92.25%～95.36%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.73%～6.10%，以上結(jié)果表明，測(cè)定總硒及無機(jī)硒的方法準(zhǔn)確度高，重復(fù)性好，通過差減法得到的樣品的有機(jī)硒含量是真實(shí)可信的，同時(shí)國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)測(cè)定值在標(biāo)準(zhǔn)值允許誤差范圍內(nèi)，說明該方法準(zhǔn)確、可靠，能夠滿足水產(chǎn)品中總硒的檢測(cè)要求。
　　二、采用氫化物原子熒光法(HG-AFS)分析不同地區(qū)刺參總硒和無機(jī)硒的含量及分布規(guī)律
　　人體內(nèi)的

5、硒元素主要是通過吸收食物中的硒而獲得，并通過機(jī)體的代謝過程將其轉(zhuǎn)化為機(jī)體所能利用的形式。而水產(chǎn)品刺參體內(nèi)的硒含量較高，尤其是可被機(jī)體利用的有機(jī)硒的含量相當(dāng)豐富。但刺參體內(nèi)硒的研究還是比較薄弱，刺參各組織中有機(jī)硒和無機(jī)硒的比例如何、不同組織間和不同地區(qū)間硒含量有何差異以及硒對(duì)刺參的生物學(xué)作用等方面還缺乏相關(guān)研究。本研究旨在探明環(huán)境中硒對(duì)刺參體內(nèi)硒含量的影響及不同形態(tài)的硒在各組織中的富集代謝情況，為進(jìn)一步進(jìn)行分子生物學(xué)方面的研究提供參考。<

6、br>　　本文首次以黃渤海域大連、東營、煙臺(tái)、青島、日照五個(gè)典型地區(qū)刺參群體為研究對(duì)象（取樣時(shí)間為2014年4月份），應(yīng)用氫化物原子熒光法對(duì)刺參體內(nèi)不同組織硒形態(tài)分布進(jìn)行了初步分析，并比較了不同地區(qū)間及不同組織間硒含量差異。結(jié)果顯示，呼吸樹為總硒和無機(jī)硒含量最高的組織，平均值為14.17±3.41mg/kg和6.19±3.83mg/kg，不同組織內(nèi)的總硒、無機(jī)硒含量變化呈現(xiàn)一致的規(guī)律，硒含量由高到低為：呼吸樹＞消化道＞肌肉＞內(nèi)壁＞外壁，

7、同時(shí)刺參體壁和肌肉（食用部分）中有機(jī)硒比例在75.63%～89.41%之間（除東營地區(qū)刺參群體肌肉組織的有機(jī)硒比例最低為53.64%）；五個(gè)地區(qū)刺參群體同一組織內(nèi)的總硒及無機(jī)硒含量均有顯著性差異，東營地區(qū)呼吸樹、消化道和肌肉中無機(jī)硒含量較高。
　　三、不同水平的外源硒對(duì)刺參生物學(xué)指標(biāo)及硒含量的影響
　　對(duì)于水產(chǎn)動(dòng)物而言，元素硒同樣具有多種重要的生理功能。刺參養(yǎng)殖過程中，大量用藥及濫用抗生素類藥物嚴(yán)重危害人類的健康，帶來細(xì)菌耐

8、藥性及藥物殘留引起的環(huán)境污染等問題。研究表明適量添加外源硒可以增強(qiáng)水產(chǎn)動(dòng)物的免疫功能，從而提高其抗病能力。本文開展了不同硒濃度的養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)，通過測(cè)定刺參成活率及相關(guān)酶的活性來研究硒對(duì)刺參的生物學(xué)影響，旨在探索硒在提高刺參的健康指標(biāo)的作用；此外，通過測(cè)定刺參不同組織的硒含量，以探討硒在體內(nèi)的分布及轉(zhuǎn)化問題，發(fā)現(xiàn)刺參體內(nèi)的硒含量變化規(guī)律，同時(shí)獲得高活性的有機(jī)硒，緩解缺硒現(xiàn)狀。
　　本文以我國北方重要養(yǎng)殖經(jīng)濟(jì)品種刺參為研究對(duì)象，采取逐級(jí)放

9、大的方法進(jìn)行在飼料中添加不同硒濃度梯度（0mg/kg、0.20mg/kg、0.40mg/kg、0.80mg/kg、1.60mg/kg、3.20mg/kg、6.40mg/kg）的富硒酵母的養(yǎng)殖試驗(yàn)，養(yǎng)殖4W后測(cè)定刺參的生物學(xué)指標(biāo)及硒含量變化。結(jié)果顯示：添加適宜濃度硒可以提高刺參的成活率（最高達(dá)100%）及消化酶的活性，蛋白酶、淀粉酶活性最高分別為35.13U/mg prot、0.51U/mg prot，分別為對(duì)照組的2.45、2.07倍；