RNA干擾NPM基因表達對白血病細胞生物學特性的影響.pdf

1、白血病是造血干細胞克隆性疾病，是一組高度異質(zhì)性的惡性血液病。靶向白血病細胞的化療是當前治療的主要手段，但仍無法解決白血病的復發(fā)、轉(zhuǎn)移及耐藥等諸多問題。目前分子水平的靶向治療成為研究的熱點問題。核仁磷酸蛋白(NPM)是主要位于核仁顆粒區(qū)的一種多功能蛋白。NPM直接參與核糖體的合成、中心體的復制等細胞增殖過程中的關鍵分子事件；同時NPM通過干擾素調(diào)節(jié)因子發(fā)揮凋亡調(diào)節(jié)作用。NPM基因異?？蓪е录毎麗盒栽鲋澈偷挚沟蛲觯c腫瘤的發(fā)生密切相關。已知

2、多種實體腫瘤細胞高表達NPM，NPM可作為診斷肝細胞癌等惡性腫瘤的分子標志物。有文獻報道白血病細胞中不同程度地高表達NPM，但NPM參與白血病發(fā)生的分子機制尚未闡明。RNA干擾技術是一種新的基因治療技術，能有效、特異地抑制細胞內(nèi)基因的表達，利用RNAi抑制某些功能基因或融合基因的表達，從而抑制細胞增殖，誘導其凋亡，增強白血病細胞對化療藥物的敏感性，已成為白血病基因治療的一條新途徑。 本研究采用RNA干擾技術，以NPM高表達的白血

3、病K562細胞系為研究對象，分析抑制NPM表達對白血病細胞增殖和凋亡的影響。主要結(jié)果和結(jié)論如下： 1.檢測白血病細胞NPM mRNA和蛋白表達。采用RT-PCR、FQ-PCR.以及免疫組化檢測K562細胞NPM基因和蛋白的表達，發(fā)現(xiàn)白血病細胞高表達NPM mRNA，模板拷貝數(shù)較正常血細胞高7.3倍，同時白血病細胞高表達NPM蛋白，提示白血病細胞高表達NPM基因。 2.構(gòu)建靶向NPM基因的RNAi重組體，轉(zhuǎn)染K562細胞后

4、觀察shRNA對靶基因的抑制作用。實驗成功構(gòu)建靶向NPM基因的pGenesil-1/NPM重組體，運用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法將重組體導入K562細胞后，F(xiàn)Q-PCR.檢測發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染細胞NPM mRNA拷貝數(shù)下降70％，免疫組化結(jié)果揭示轉(zhuǎn)染細胞NPM蛋白水平的明顯下調(diào)，證明pGenesil-1/NPM能夠高效沉默K562細胞NPM基因的表達。 3.觀察抑制NPM基因?qū)562細胞生物學特性的影響。運用MTT、半固體培養(yǎng)技術、流式細胞術檢測R