利多卡因預(yù)處理對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷保護(hù)作用及水通道蛋白4表達(dá)的影響.pdf

1、本研究分為三部分： 第一部分：利多卡因預(yù)處理對(duì)腦缺血再灌注腦保護(hù)作用的量效關(guān)系 目的：探討利多卡因預(yù)處理對(duì)大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷腦保護(hù)作用的劑量效應(yīng)關(guān)系。 方法：Sprague-Dawley雄性大鼠168只隨機(jī)分成7組：假手術(shù)組(Sham，n=24)，缺血再灌注組(I/R，n=24)，利多卡兇組(Lido，n=120)，其中利多卡因組根據(jù)注射藥物劑量分成5個(gè)亞組(L1～5)，每個(gè)亞組24只。采用右側(cè)人腦中動(dòng)脈

2、線栓陰斷缺血模型(MCAO/R)，假手術(shù)組線栓置入深度為10mm，L1～5組分別于缺血前30min經(jīng)腹腔注射利多卡因2.5mg·kg-1、5mg·kg-1、10mg·kg-1、20mg·kg-1、40mg·kg-1。行預(yù)處理，缺血再灌注組未給予特殊處理。缺血2h后線栓拔出恢復(fù)大腦中動(dòng)脈再灌注，72h后根據(jù)Longa 5分制法觀察各組動(dòng)物神經(jīng)功能缺損評(píng)分并統(tǒng)計(jì)各組存活率后，各組隨機(jī)選取4大鼠斷頭取腦(除去小腦、腦干)進(jìn)行腦組織TTC染色，

3、測(cè)定腦梗死體積比率，各組隨機(jī)選取4只大鼠行免疫組織化學(xué)法檢測(cè)缺血側(cè)額葉皮層細(xì)胞凋亡。 結(jié)果：L1、L2、L3組動(dòng)物存活率高于I/R組，神經(jīng)功能缺損評(píng)分明顯降低，同時(shí)缺血側(cè)額葉皮層細(xì)胞凋亡也減輕，腦梗死體積比率減小，但L4、L5組存活率低，神經(jīng)功能缺損評(píng)分升高，缺血側(cè)額葉皮層神經(jīng)細(xì)胞凋亡較I/R組重，腦梗死體積比率增大。 結(jié)論：腹腔注射利多卡因2.5mg·kg-1、5mg·kg-1、10mg·kg-1預(yù)處理對(duì)大鼠腦缺血再灌

4、注具有腦保護(hù)作用，且以10mg·kg-1這一劑量作用最為顯著，而大劑量20mg·kg-1、40mg·kg-1。則加重了缺血后再灌注時(shí)腦的損傷。 第二部分：大鼠腦缺血再灌注時(shí)缺血皮層水通道蛋白4表達(dá)的時(shí)程變化 目的：探討大鼠局灶性腦缺血再灌注時(shí)額葉皮層腦組織中水通道蛋白4(AQP4)表達(dá)時(shí)程變化及與腦水腫時(shí)程、血腦屏障通透性改變間關(guān)系。 方法：雄性Sprague-Daley大鼠112只，隨機(jī)分為假手術(shù)組(Sham，

5、n=16)及缺血再灌注組(I/R，n=96)，其中缺血再灌注組根據(jù)再灌注后取材時(shí)間分為再灌注4、6、12、24、48和72h組共6個(gè)亞組，各亞組均含16只大鼠。采用右側(cè)大腦中動(dòng)脈線栓阻斷(MCAO/R)制備局灶腦缺血再灌注模型，缺血2h后將栓線拔出，恢復(fù)再灌注。假手術(shù)組置線栓深度為10mm。根據(jù)分組于再灌注各時(shí)間點(diǎn)觀察動(dòng)物各組大鼠的神經(jīng)功能缺損評(píng)分，并隨機(jī)各選取組內(nèi)4只大鼠分別行干濕重法測(cè)定腦水含量以評(píng)價(jià)腦水腫，伊文氏藍(lán)(EB)法測(cè)定血

6、腦屏障通透性，免疫組化法、蛋白印跡法測(cè)定腦內(nèi)AQP4表達(dá)。 結(jié)果：(1)與假手術(shù)組相比，腦缺血再灌注各亞組的神經(jīng)功能均出現(xiàn)明顯缺損，尤以再灌注48h、72h兩亞組為甚。(2)腦缺血后再灌注4～6h，AQP4表達(dá)上調(diào)，至12h上調(diào)顯著，48～72h達(dá)高峰。(3)再灌注各亞組腦水腫與EB含量增加的趨勢(shì)相一致。(4)AQP4表達(dá)與腦水含量、EB含量變化呈顯性正相關(guān)(r=0.68、r=0.81，P<0.05)。 結(jié)論：AQP4表

7、達(dá)變化可能參與了缺血性腦水腫的產(chǎn)生，并與BBB通透性改變程度呈正相關(guān)。 第三部分：利多卡因預(yù)處理對(duì)大鼠腦缺血再灌注時(shí)水通道蛋白4表達(dá)的影響 目的：觀察利多卡因預(yù)處理對(duì)局灶性腦缺血再灌注大鼠腦組織水通道蛋白4(AQP4)表達(dá)的影響，探討其腦保護(hù)作用機(jī)制。 方法：104只雄性Sprague-Dawley大鼠隨機(jī)分成假手術(shù)組(sham，n=26)、缺血再灌注組(I/R，n=26)、利多卡因組(Lido，n=26)及生理

8、鹽水組(Saline，n=26)4組，后兩組于缺血前30min腹腔注射利多卡因10mg·kg-1。及同等體積的生理鹽水行預(yù)處理。采用右側(cè)大腦中動(dòng)脈線栓法(MCAO/R)建立局灶性腦缺血再灌注模型，缺血2h再灌注72h后行神經(jīng)功能缺損評(píng)分、斷頭取腦(除去小腦、腦干)行TTC染色測(cè)定腦梗死體積比率，干濕重法測(cè)腦含水量評(píng)價(jià)腦水腫，腦組織內(nèi)伊文氏藍(lán)含量測(cè)定評(píng)價(jià)血腦屏障通透性改變，免疫組織化學(xué)及蛋白印跡法檢測(cè)梗死腦區(qū)周?chē)~葉皮層內(nèi)AQP4表達(dá)。