HIF-1α特異性抑制劑YC-1對(duì)缺氧條件下人膀胱癌細(xì)胞株T24細(xì)胞生物學(xué)行為的影響.pdf

1、第一章人膀胱移行細(xì)胞癌中HIF-1α、VEGF、MMP-2和Bcl-2的表達(dá)及其相關(guān)性的研究。
　　 目的：探討HIF-1α、VEGF、MMP-2和Bcl-2在BTCC中的表達(dá)及其意義。
　　 方法：用免疫組化的方法檢測(cè)HIF-1α、VEGF、MMP-2和Bcl-2在42例BTCC和9例正常膀胱組織中的表達(dá)情況，并分析其與BTCC臨床病理因素的關(guān)系。
　　 結(jié)果：BTCC組織中HIF-1α，VEGF，MMP-2和

2、Bcl-2的陽(yáng)性率分別為61.9％(26/42)，69.0％(29/42)，61.9％(26/42)和64.3％(27/42)高于正常膀胱組織的22.2％(2/9)(P<0.05)，22.2％(2/9)(P<0.01)，22.2％(2/9)(P<0.05)和11.1％(1/9)(P<0.01)。HIF-1α，VEGF，MMP-2和Bcl-2陽(yáng)性率與BTCC的病理分級(jí)呈正相關(guān)。HIF-1α，VEGF和MMP-2的陽(yáng)性率與臨床分期呈正相關(guān)，

3、Bcl-2陽(yáng)性率與臨床分期無(wú)關(guān)。HIF-1α的陽(yáng)性率與VEGF(r=0.429，P<0.01)、MMP-2(r=0.495，P<0.01)和Bcl-2(r=0.336，P<0.05)的陽(yáng)性率呈明顯正相關(guān)。
　　 結(jié)論：
　　 1、BTCC組織中HIF-1α，VEGF，MMP-2和Bcl-2的陽(yáng)性率明顯高于正常膀胱組織。
　　 2、BTCC組織中HIF-1α，VEGF，MMP-2和Bcl-2的陽(yáng)性率高低與BTCC的

4、腫瘤病理分級(jí)明顯相關(guān)，病理分級(jí)越高，陽(yáng)性率越高；
　　 3、BTCC組織中HIF-1α，VEGF，MMP-2的陽(yáng)性率高低與BTCC的腫瘤臨床分期明顯相關(guān)，臨床分期越高，陽(yáng)性率越高；Bcl-2陽(yáng)性率與臨床分期無(wú)關(guān)。
　　 第二章 YC-1對(duì)缺氧T24細(xì)胞中HIF-1α基因的mRNA及蛋白表達(dá)的影響。
　　 目的：探討YC-1作用于缺氧T24細(xì)胞后，對(duì)其HIF-1α基因的mRNA及蛋白表達(dá)的影響。
　　 方法

5、：設(shè)定不同濃度的YC-1(0μmol/L，1μmol/L，10μmol/L，50μmol/L，100μmol/L)作用于缺氧T24細(xì)胞12h、24h和48h(0μmol/L12h組為對(duì)照組)，半定量RT-PCR檢測(cè)T24細(xì)胞中HIF-1α mRNA的變化，Western blot檢測(cè)HIF-1α蛋白的表達(dá)。
　　 結(jié)果：半定量RT-PCR和Western blot檢測(cè)，不同濃度(1μmol/L，1μmol/L，10μmol/L，

6、50μmol/L，100μmol/L)YC-1于缺氧T24細(xì)胞不同時(shí)間(12h，24h，48h)后，均降低HIF-1α mRNA表達(dá)比值和其蛋白表達(dá)比值。不同濃度(0μmol/L，1μmol/L，10μmol/L，50μmol/L，100μmol/L)YC-1作用12h時(shí)HIF-1α mRNA表達(dá)比值(HIF-1α/GAPDH)分別為1.258±0.049，1.019±0.014，0.866±0.034，0.580±0.018，0.46

7、0±0.024；作用24h時(shí)分別為1.439±0.050，0.983±0.030，0.667±0.026，0.406±0.041，0.387±0.018；作用48h時(shí)分別為1.516±0.036，0.731±0.032，0.615±0.034，0.351±0.024，0.317±0.019，各時(shí)間點(diǎn)不同濃度組與對(duì)照組比較均有下調(diào)，并且呈明顯的時(shí)間和劑量效應(yīng)關(guān)系(P<0.01)；Western blot檢測(cè)，不同濃度(0μmol/L，1μ

8、mol/L，10μmol/L，50μmol/L，100μmol/L)YC-1作用12h時(shí)，HIF-1α蛋白表達(dá)比值(HIF-1α/GAPDH)分別為0.192±0.003，0.176±0.004，0.115±0.003，0.075±0.002，0.056±0.003；作用24h時(shí)，分別為0.203±0.004，0.150±0.003，0.088±0.003，0.055±0.004，0.035±0.002；作用48h時(shí)，分別為0.243±

9、0.005，0.149±0.003，0.069±0.003，0.040±0.002，0.032±0.002，各時(shí)間點(diǎn)不同濃度組與對(duì)照組比較均有下調(diào)，并且呈明顯的時(shí)間和劑量效應(yīng)關(guān)系(P<0.01)。
　　 結(jié)論：YC-1能抑制缺氧T24細(xì)胞中HIF-1α基因mRNA及其蛋白的表達(dá)，并且呈明顯的時(shí)間和劑量效應(yīng)關(guān)系。
　　 第三章 YC-1對(duì)缺氧T24細(xì)胞HIF-1α介導(dǎo)的基因及其生物學(xué)行為的影響。
　　 目的：探討Y

10、C-1作用于缺氧T24細(xì)胞后，對(duì)其HIF-1α介導(dǎo)的基因及其生物學(xué)行為，包括細(xì)胞存活率、凋亡率、侵襲力等的影響。
　　 方法：設(shè)定不同濃度的YC-1(0μmol/L，1μmol/L，10μmol/L，50μmol/L，100μmol/L)作用于缺氧T24細(xì)胞48h后，Western blot檢測(cè)VEGF、MMP-2、Bcl-2蛋白的表達(dá)，MTT法檢測(cè)細(xì)胞存活率，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡率，Transwell侵襲小室法檢測(cè)細(xì)胞侵襲能

11、力。
　　 結(jié)果：不同濃度的YC-1(0μmol/L，1μmol/L，10μmol/L，50μmol/L，100μmol/L)作用于缺氧T24細(xì)胞48h后，VEGF蛋白表達(dá)比值(VEGF/GAPDH)分別為0.496±0.004，0.391±0.003，0.319±0.002，0.290±0.003，0.171±0.003；MMP-2蛋白表達(dá)比值(MMP-2/GAPDH)分別為0.611±0.006，0.435±0.003，0.

12、323±0.002，0.298±0.002，0.231±0.003；Bcl-2蛋白表達(dá)比值(Bcl-2/GAPDH)分別為0.396±0.006，0.266±0.003，0.198±0.003，0.156±0.003，0.089±0.003，呈明顯的劑量效應(yīng)關(guān)系(P<0.01)。不同濃度的YC-1(0μmol/L，1μmol/L，10μmol/L，50μmol/L，100μmol/L)作用于缺氧T24細(xì)胞48h后，MTT法檢測(cè)細(xì)胞存活率

13、分別為100％，94.17％±1.18％，85.55％±1.20％，82.81％±1.27％，77.33％±0.99％；流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡率分別為5.55％±1.32％.6.55％±1.35％。9.05％±1.54％。11.83％±2.78％，16.05％±2.26％；Transwell侵襲小室法檢測(cè)細(xì)胞侵襲能力，平均遷移細(xì)胞數(shù)分別為54.0±4.0，48.2±4.7，41.4±4.4，31.4±3.8，25.8±5.3，均呈明顯的

14、劑量效應(yīng)關(guān)系(P<0.01)。
　　 結(jié)論：
　　 1、YC-1作用于人膀胱癌T24細(xì)胞后，對(duì)HIF-1α介導(dǎo)的基因VEGF、MMP-2、Bcl-2亦有明顯的抑制作用，并且呈顯著的劑量效應(yīng)關(guān)系。
　　 2、YC-1作用于人膀胱癌T24細(xì)胞后，對(duì)T24細(xì)胞的增殖有明顯抑制作用，并且呈顯著的劑量效應(yīng)關(guān)系。
　　 3、YC-1作用于人膀胱癌T24細(xì)胞后，明顯誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，凋亡的誘導(dǎo)作用呈顯著劑量效應(yīng)關(guān)系。

15、>　　 4、YC-1作用于人膀胱癌T24細(xì)胞后，對(duì)T24細(xì)胞的侵襲力有明顯抑制作用，并且呈顯著的劑量效應(yīng)關(guān)系。
　　 第四章 YC-1對(duì)T24細(xì)胞ERK/P38MAPK信號(hào)通路的調(diào)節(jié)作用。
　　 目的：探討YC-1是否通過(guò)ERK/P38MAPK信號(hào)通路機(jī)制作用于膀胱癌T24細(xì)胞，并由此抑制HIF-1α基因的表達(dá)。
　　 方法：將膀胱癌T24細(xì)胞用ERK和P38MAPK特異性抑制劑PD98059(25μmol/L

16、)和SB203580(15μmol/L)預(yù)處理后，分別置入缺氧和常氧環(huán)境下培養(yǎng)，同時(shí)用YC-150μmol/L作用后，Westernblot分別測(cè)定HIF-1α蛋白的表達(dá)。
　　 結(jié)果：常氧培養(yǎng)環(huán)境下，對(duì)照組、YC-1組、YC-1+PD98059、YC-1+SB203580組的HIF-1α蛋白表達(dá)比值(HIF-1α/GAPDH)分別為0.166±0.008，0.044±0.008，0.068±0.010，0.155±0.010，

17、YC-1組和YC-1+PD98059組比較有顯著性差異(P<0.01)，YC-1組和YC-1+SB203580組比較亦有顯著性差異(P<0.01)；缺氧培養(yǎng)環(huán)境下，則分別為0.346±0.009，0.128±0.009，0.201±0.008，0.221±0.007，YC-1組和YC-1+PD98059組比較有顯著性差異(P<0.01)，YC-1組和YC-1+SB203580組比較亦有顯著性差異(P<0.01)。
　　 結(jié)論：<