臺州地區(qū)耳聾患者12S rRNA和GJB2基因變異的頻譜繪制及遺傳學分析.pdf

1、目的：
　　 1.繪制浙江省臺州地區(qū)非綜合征型耳聾患者線粒體12S rRNA和GJB2基因變異頻譜，完善臺州地區(qū)耳聾患者致病基因和變異位點的數(shù)據(jù)庫。
　　 2.進一步闡明攜帶線粒體12S rRNAA1555G的耳聾患者可能的高外顯率的發(fā)病機制。
　　 3.探討GJB2基因各變異類型特點及其對應耳聾表型特點，提供GJB2基因變異分子診斷方法，為GJB2基因診斷提供依據(jù)。
　　 4.初步制定線粒體12S rR

2、NA和GJB2基因耳聾遺傳咨詢程序、內(nèi)容和方式。
　　 方法：
　　 1.收集臺州地區(qū)助聽器配置耳聾患者、溫嶺市聾啞學?；純汉蜏貛X市第一人民醫(yī)院耳鼻喉科門診非綜合征型耳聾患者共173例血樣，并采集患者臨床資料，進行統(tǒng)一整理。
　　 2.提取173例耳聾患者的血樣基因組DNA，進行線粒體12S rRNA和GJB2基因聚合酶鏈反應(polymerise chain reaction，PCR)擴增，產(chǎn)物純化后測序。使用

3、生物軟件如DNAStar和Chromas2.0等將測序結果與線粒體和GJB2的標準參考序列進行比對分析，查找線粒體基因組和GJB2變異位點，統(tǒng)計這兩個基因患者的變異位點和樣本數(shù)目，并繪制臺州地區(qū)耳聾患者這兩個基因的變異頻譜。
　　 3.將篩查到的攜帶線粒體12S rRNAA1555G變異的耳聾患者進行線粒體基因組的擴增和測序，根據(jù)測序結果分析線粒體單體型，結合臨床資料進一步分析單體型對耳聾表型表達的影響，以及是否存在其他線粒體上

4、的繼發(fā)突變對耳聾表型表達的影響。
　　 4.分析臺州地區(qū)耳聾患者GJB2基因耳聾相關致病性變異位點的類型特點及其對應耳聾表型表達特點。
　　 5.對篩查到的攜帶線粒體12S rRNA和GJB2基因上耳聾相關變異位點的耳聾患者進行遺傳學分析，包括遺傳方式及遺傳規(guī)律等，并進一步總結及初步制定遺傳咨詢的程序和內(nèi)容。
　　 結果：
　　 1.成功收集浙江省臺州地區(qū)助聽器配置耳聾患者、溫嶺市聾啞學校患兒和溫嶺市第一

5、人民醫(yī)院耳鼻喉科門診耳聾患者共173例血樣。
　　 2.成功繪制臺州地區(qū)耳聾患者線粒體12S rRNA和GJB2基因上變異頻譜。
　　 3.173例臺州地區(qū)的非綜合征型耳聾患者中攜帶線粒體12S rRNAA1555G變異患者有6例，占耳聾患者的3.47％。結合線粒體全基因組的測序結果這6例患者的分別是線粒體東亞單體型A4、B4a2、B5b1、D4b2b2、F1a和F3a，另外，發(fā)現(xiàn)有2例患者除攜帶A1555G變異外分別攜

6、帶線粒體tRNAThr上的T15943C和A15924G變異。
　　 4.173例臺州地區(qū)的耳聾患GJB2基因上發(fā)現(xiàn)GJB2基因序列改變達到73.41％;其中致病變異耳聾相關患者43例，占耳聾患者的24.86％，最常見的235delC變異率達到21.97％。
　　 5.分析線粒體12S rRNA和GJB2基因耳聾相關的致病變異位點遺傳特征，并初步制定屬于本實驗室和Attardi線粒體生物醫(yī)學研究院的主要以這兩個基因為主的

7、耳聾遺傳咨詢程序、內(nèi)容和方式。
　　 結論：
　　 1.發(fā)現(xiàn)6例攜帶線粒體12S rRNAA1555G變異患者，占173例臺州地區(qū)耳聾患者的3.47％。線粒體單體型對A1555G變異患者的耳聾表型表達可能影響不大。線粒體tRNAThr上的T15943C和A15924G變異可能是影響線粒體A1555G變異耳聾患者表型表達的新的繼發(fā)突變位點。
　　 2.臺州地區(qū)非綜合征型耳聾患者GJB2基因變異占73.41％，致病變