化痰益氣法對(duì)匹羅卡品致癇鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞的影響.pdf

1、目的: 提出有關(guān)癲癇病因病機(jī)的新認(rèn)識(shí)，以確立新的治療方法。通過(guò)觀察化痰益氣法對(duì)匹羅卡品致病大鼠的抗癇作用以及對(duì)致癇大鼠海馬神經(jīng)元凋亡的綜合調(diào)節(jié)作用。探究癲癇的發(fā)病機(jī)制以及化痰益氣法實(shí)驗(yàn)藥物(化痰1號(hào)方)可能的抑癇機(jī)理，為新藥開(kāi)發(fā)奠定基礎(chǔ)，為臨床治療提供理論依據(jù)。 方法: 參考癲癇古今相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行總結(jié)。采用氯化鋰—匹羅卡品腹腔注射方法建立大鼠顳葉癲癇模型，腹腔注射前各組均選用灌胃法給予相應(yīng)藥物灌胃。連續(xù)灌胃7天后，

2、建立PILO組模型和化痰1號(hào)干預(yù)組模型，對(duì)照組以生理鹽水代替匹羅卡品腹腔注射；免疫組織化學(xué)方法對(duì)照觀察大鼠海馬內(nèi)腫瘤壞死因子—α(TNF—α)及膠質(zhì)原纖維酸性蛋白(GFAP)陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)的變化規(guī)律。觀察化痰益氣法實(shí)驗(yàn)藥物對(duì)海馬神經(jīng)元凋亡的影響以及腦保護(hù)作用。實(shí)驗(yàn)研究包括兩部分；通過(guò)測(cè)定化痰1號(hào)對(duì)致癇大鼠行為學(xué)改變、發(fā)作潛伏期、持續(xù)時(shí)間，探討化痰1號(hào)的抗癇作用以及改善致癇大鼠行為學(xué)等機(jī)制；探討化痰1號(hào)對(duì)匹羅卡品致癇大鼠海馬腫瘤壞死因子—α

3、與膠質(zhì)原纖維酸性蛋白(GFAP)陽(yáng)性細(xì)胞的影響。 結(jié)果: 1．行為學(xué)觀察：生理鹽水對(duì)照組大鼠無(wú)任何癇性發(fā)作。PILO模型組有80.00％(24/30)的動(dòng)物達(dá)Racine分級(jí)Ⅲ級(jí)以上發(fā)作；10.00％(3/30)10.00的大鼠死亡；10.00％(3/30)的大鼠未達(dá)Ⅲ級(jí)發(fā)作；動(dòng)物自發(fā)性發(fā)作(SRMS)為4.51±1.48次/只?；?號(hào)干預(yù)組大鼠Ⅲ級(jí)以上發(fā)作的發(fā)生率為76.70％(23/30)；死亡率為6.67％(2/

4、30)；16.67％(5/30)的大鼠未達(dá)Ⅲ級(jí)發(fā)作；SRMS僅為2.81±1.23次/只。 2．組織病理學(xué)觀察：對(duì)照組海馬各區(qū)神經(jīng)元無(wú)明顯變化。PILO模型組大鼠癲癇發(fā)作3h(SE3h)，海馬門(mén)區(qū)、CA1、CA3區(qū)開(kāi)始散在出現(xiàn)神經(jīng)元變性、壞死，細(xì)胞排列不整齊，少量神經(jīng)細(xì)胞脫失；至SE3d時(shí)，上述病理改變達(dá)到高峰，齒狀回顆粒細(xì)胞也開(kāi)始出現(xiàn)變性；SE14d時(shí)，神經(jīng)元受損狀況漸恢復(fù)，細(xì)胞排列漸整齊。化痰1號(hào)干預(yù)組與PILO模型組比較，

5、各時(shí)間點(diǎn)神經(jīng)細(xì)胞損傷情況明顯減輕。 3．免疫組化結(jié)果：生理鹽水對(duì)照組中，TNF—α在大鼠腦組織呈胞漿淺染色，極少有胞核免疫陽(yáng)性反應(yīng)；而PILO模型組中，TNF—α免疫陽(yáng)性產(chǎn)物則主要在胞漿中，呈綜黃色顆粒表達(dá)，其陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目在SE3h時(shí)即開(kāi)始增多，以CA1、CA3和齒狀回門(mén)區(qū)為主，于SE3d時(shí)達(dá)到高峰，之后漸下降，至SE28d時(shí)仍比正常水平略高；化痰1號(hào)干預(yù)組各時(shí)間點(diǎn)TNF—α胞漿陽(yáng)性表達(dá)均較PILO組明顯減少。生理鹽水對(duì)照組GF

6、AP陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量很少，胞體小，突起少而細(xì)?。籔ILO模型組GFAP陽(yáng)性細(xì)胞胞體截面積增大、突起及其分支增多，且其細(xì)胞數(shù)量變化規(guī)律與TNF—α陽(yáng)性細(xì)胞類似化；化痰1號(hào)干預(yù)組各時(shí)間點(diǎn)的GFAP陽(yáng)性表達(dá)均較PILO組明顯減弱。 結(jié)論: 氯化鋰—匹羅卡品慢性癲癇模型能夠復(fù)制出與人類顳葉癲癇相似的行為學(xué)和病理學(xué)改變。海馬星形膠質(zhì)細(xì)胞增生在癲癇發(fā)作早期是對(duì)癇性發(fā)作和神經(jīng)元損傷的適應(yīng)性反應(yīng)，而晚期則可能促進(jìn)癲癇的復(fù)發(fā)?；?號(hào)可抑制海