TaCAD12和TaPK-R1過量表達(dá)轉(zhuǎn)基因小麥的分子特性與功能分析.pdf

1、小麥?zhǔn)俏覈闹饕Z食作物。小麥紋枯病是由禾谷絲核菌（Rhizoctonia cerealis）引起的小麥重要土傳病害。凍害是影響小麥生長最主要的自然災(zāi)害之一。生產(chǎn)上，抗紋枯病、兼抗紋枯病與凍害小麥品種較為匱乏，因此分離克隆抗紋枯、耐凍害相關(guān)基因，研究其功能，為抗紋枯病及凍害育種提供理論基礎(chǔ)，具有重要意義。本研究通過構(gòu)建表達(dá)載體p20-Rssp2897:6MYC-TaCAD12、pAHC25-MYC-TaPK-R1，用基因槍轉(zhuǎn)化法獲得轉(zhuǎn)T

2、aCAD12、TaPK-R1基因小麥。獲得以下研究結(jié)果:
　　轉(zhuǎn)TaCAD12基因小麥的研究結(jié)果:(1)對轉(zhuǎn)TaCAD12基因小麥T0-T2代進(jìn)行PCR以及qRT-PCR分析，獲得5個轉(zhuǎn)TaCAD12基因小麥株系。(2)用Western blot分析5個轉(zhuǎn)TaCAD12基因小麥株系中的陽性植株，結(jié)果表明這5個轉(zhuǎn)基小麥株系中c-MYC-TaCAD12融合蛋白均被表達(dá)。(3)用WK207、R0301分別對轉(zhuǎn)TaCAD12基因小麥T1、

3、T2代進(jìn)行接種，于收獲期進(jìn)行紋枯病鑒定，結(jié)果表明，在轉(zhuǎn)基因小麥中過量表達(dá)TaCAD12基因，能提高對不同來源及致病力禾谷絲核菌的抗性。
　　轉(zhuǎn)TaPK-R1基因小麥的研究結(jié)果:(1)對轉(zhuǎn)TaPK-R1基因小麥T0-T4代進(jìn)行PCR、RT-PCR以及qRT-PCR分析，獲得3個轉(zhuǎn)TaPK-R1基因小麥株系。(2)利用Westernblot分析3個轉(zhuǎn)TaPK-R1基因小麥株系中的陽性植株，結(jié)果表明這3個轉(zhuǎn)基因小麥株系中c-MYC-Ta

4、PK-R1融合蛋白均被表達(dá)。(3)對T4代轉(zhuǎn)基因小麥及受體進(jìn)行低溫處理，統(tǒng)計存活率、測定脯氨酸和電解質(zhì)滲漏率含量，結(jié)果表明，過量表達(dá)TaPK-R1基因提高了轉(zhuǎn)基因小麥對寒冷環(huán)境的適應(yīng)性。(4)用R0301對轉(zhuǎn)TaPK-R1基因小麥T1、T2代進(jìn)行接種及紋枯病鑒定，用WK207對轉(zhuǎn)TaPK-R1基因小麥T3、T4代進(jìn)行接種及紋枯病鑒定，抗紋枯病鑒定結(jié)果表明，在轉(zhuǎn)基因小麥中過表達(dá)TaPK-R1基因，能在不同程度上提高小麥對不同菌株禾谷絲核菌