微小按蚊種群群體遺傳學(xué)特征研究.pdf

1、微小按蚊是我國重要的瘧疾傳播媒介,室內(nèi)滯留噴灑和擬除蟲菊酯殺蟲劑浸泡蚊帳是重要的防治措施,我國云南一直在應(yīng)用該化學(xué)方法防制。有報(bào)道稱已發(fā)現(xiàn)微小按蚊對擬除蟲菊酯殺蟲劑產(chǎn)生了抗藥性,有研究認(rèn)為我國云南的微小按蚊A和C型吸血行為和棲息行為也有所差異,但更進(jìn)一步的行為差異,特別是應(yīng)用殺蟲劑之后,在殺蟲劑壓力下微小按蚊對殺蟲劑抗藥性與吸血和棲息行為的關(guān)系,還有待于深入研究。
　　1.微小按蚊分子分型
　　微小按蚊復(fù)合組成員,以及幾種親

2、緣相近的蚊種具有相近的外形特征,在外形上容易混淆,形態(tài)學(xué)鑒定容易出現(xiàn)錯誤。該復(fù)合組迄今已記錄有微小按蚊A、B、C、D、E,我國云南南部主要為A型、C型,近年也有A/C混合型微小按蚊的報(bào)道。先對做采集的蚊蟲進(jìn)行形態(tài)學(xué)分型,再用PCR方法對捕獲的微小按蚊進(jìn)行分子分型。An.minimusA364只,An.minimusC593只,An.jeyporiensis19只,An.aconitus15只,另有2只疑似為微小按蚊A/C混合型,54只不

3、是微小組按蚊種團(tuán)成員。
　　2.微小按蚊棲息習(xí)性研究
　　在東方紅村選取若干牛圈和人房為采樣點(diǎn),使用誘蚊燈采集成蟲,每日19:00掛燈開始采集,次日8:00收集蚊蟲。對各個誘蚊燈所采集蚊蟲進(jìn)行分別計(jì)數(shù)。經(jīng)過spss軟件統(tǒng)計(jì)分析得出結(jié)論An.minimusA偏好棲息人房;而An.minimusC偏好棲息于牛圈。
　　3.微小按蚊吸血習(xí)性研究
　　根據(jù)東方紅村的實(shí)際情況調(diào)查當(dāng)?shù)氐闹饕獎游镅礊榕?、豬和雞,再加上人血源

4、,設(shè)計(jì)特異性引物,鑒別捕獲蚊蟲胃血來源。結(jié)果經(jīng)spss軟件分析,An.minimusA無明顯的吸血偏好;而An.minimusC偏好吸食牛血。
　　4.微小按蚊鈉通道基因序列研究
　　登錄GenBank可以查詢到An.minimus鈉離子通道部分編碼序列區(qū)(CDS)片段序列(GenBank:GU064930.3)和para型鈉離子通道基因序列(GenBank:EU155386.1)。根據(jù)para型鈉離子通道基因序列設(shè)計(jì)引物擴(kuò)

5、增An.minimus的ⅡS6區(qū)段序列并測序,共測序微小按蚊736只,其中415只測序結(jié)果理想,比對結(jié)果顯示在常見kdr突變的1014位點(diǎn)并沒有發(fā)現(xiàn)突變,提示該地區(qū)微小按蚊的擊倒抗性很低或并沒有產(chǎn)生擊倒抗性。
　　5.微衛(wèi)星位點(diǎn)多樣性檢測結(jié)果及分析
　　登錄GenBank可以查詢到An.minimus已有28條微衛(wèi)星序列,編號為:HQ839797.1、HQ839799.1、HQ839801.1、HQ839803.1、HQ83

6、9797.1、HQ839795.1、HQ839793.1、HQ839793.1、HQ839789.1、HQ839816.1、HQ839814.1、HQ839810.1、HQ839812.1、HQ839808.1、HQ839806.1、HQ839804.1、HQ839802.1、HQ839802.1、HQ839798.1、HQ839796.1、HQ839794.1、HQ839792.1、HQ839792.1、HQ839815.1、HQ83

7、9813.1。根據(jù)以上序列設(shè)計(jì)引物,其中AM4、AM7-1、AM8、AM12、AM21、AM23、AM25-1和AM27-1,八個位點(diǎn)擴(kuò)增出清晰的條帶,測序結(jié)果理想,可用于微衛(wèi)星數(shù)據(jù)分析。將采集蚊蟲分為八個組:A組為An.minimusA(云南東方紅村),B組為An.minimusC(云南東方紅村),C組為An.jeyporiensis(云南龍?zhí)链?,D組為An.aconitus(海南牙營村),E組為An.aconitus(云南龍?zhí)链?

8、,F組為An.minimusA(云南龍?zhí)链?,G組為An.minimusC(云南龍?zhí)链?,H組為An.minimusA(海南牙營村),用微衛(wèi)星標(biāo)記對這些組的期望雜合度與觀察雜合度、多態(tài)性信息含量、哈迪-溫伯格平衡分析、群體內(nèi)的近交系數(shù)、群體分化系數(shù)等多方面分析,并對微小按蚊種團(tuán)進(jìn)行聚類。各個位點(diǎn)期望雜合度與觀察雜合度的值非常相似,說明這些標(biāo)記具有良好的多態(tài)性,適用于群體分析。實(shí)驗(yàn)用8個按蚊種群間的生物多樣性很好,各個位點(diǎn)的平均多態(tài)信息含