關(guān)節(jié)腔注射氯諾昔康PLGA微球的研究.pdf

1、骨性關(guān)節(jié)炎(osteoarthritis,OA)是一種常見的退行性關(guān)節(jié)疾病,在高齡人群中的發(fā)病率較高,常導(dǎo)致患者關(guān)節(jié)軟骨退化及關(guān)節(jié)內(nèi)骨質(zhì)增生、變形等。手術(shù)治療OA費(fèi)用高、療效有限且患者順應(yīng)性較差。口服給藥治療OA胃腸毒副作用大,局部血藥濃度低且療效較差。局部外用制劑透皮吸收差且對局部皮膚有刺激性。因此關(guān)節(jié)腔注射給藥治療OA逐漸成為OA治療的研究熱點(diǎn)。
　　 氯諾昔康是一種新型的非甾體類抗炎藥,具有很好的抗炎、鎮(zhèn)痛和解熱作用。此外

2、,氯諾昔康對OA具有雙重治療作用,既能達(dá)到鎮(zhèn)痛和抗炎的目的又能減輕關(guān)節(jié)炎的破壞并防止骨變性,修復(fù)受損關(guān)節(jié)。但氯諾昔康普通注射劑關(guān)節(jié)腔給藥后藥物會迅速滲漏進(jìn)入血液循環(huán),降低了局部藥物濃度。另外,藥物滲漏至體循環(huán)后導(dǎo)致全身吸收,增加了毒副作用。氯諾昔康半衰期短,為了維持藥效必須長期、頻繁用藥降低了病人的順應(yīng)性。
　　 本課題以性能優(yōu)良的生物可降解和生物相容性的載體材料乳酸-羥基乙酸共聚物(poly(lactic-co-glycoli

3、c acid),PLGA)為載體材料,采用乳化-溶劑揮發(fā)法制備關(guān)節(jié)腔注射用氯諾昔康PLGA微球。研究內(nèi)容主要包括:氯諾昔康PLGA微球混懸液的制備及其干燥方法的篩選與優(yōu)化、干燥微球的理化性質(zhì)研究與體外釋藥機(jī)理研究、滅菌方法與穩(wěn)定性研究、生物相容性和藥效學(xué)研究。
　　 1干燥氯諾昔康PLGA微球的制備和理化性質(zhì)的研究
　　 本文采用S/O/W乳化溶劑揮發(fā)法制備氯諾昔康PLGA微球。首先,以微球表面形態(tài)、粒徑及粒度分布為指標(biāo)

4、考察了冷凍干燥及真空干燥兩種干燥方法對微球性質(zhì)的影響,結(jié)果表明:真空干燥的氯諾昔康PLGA微球粘連嚴(yán)重,不適合用于氯諾昔康PLGA微球的干燥,故選擇冷凍干燥法干燥微球并對凍干進(jìn)行了優(yōu)化。其次,對冷凍干燥工藝進(jìn)行了優(yōu)化；最后,采用優(yōu)化的冷凍干燥工藝制備三批氯諾昔康PLGA微球,對理化性質(zhì)進(jìn)行研究。結(jié)果表明,優(yōu)化的凍干工藝為:以2％的甘露醇為凍干保護(hù)劑,-80℃冰箱預(yù)凍8h后放入冷凍干燥機(jī)內(nèi)冷凍干燥12h得到干燥疏松的微球粉末。光學(xué)顯微鏡和

5、掃描電鏡下觀察,氯諾昔康PLGA微球外形圓整、無粘連；經(jīng)DSC分析,氯諾昔康PLGA微球確已形成；平均粒徑為(7.51±0.35)μm；包封率和載藥量分別為(81.88±1.28)％和(12.89±0.49)％；復(fù)溶后pH值近中性,達(dá)到2005版藥典規(guī)定的要求。
　　 2氯諾昔康PLGA微球體外釋藥性與降解機(jī)理的研究
　　 采用動態(tài)膜透析法對冷凍干燥氯諾昔康PLGA微球體外釋藥性進(jìn)行考察。采用提高釋放介質(zhì)溫度和攪拌速度的

6、方法建立了加速釋藥方法以縮短評價(jià)周期。從外觀、粒徑變化和失重率三個(gè)方面研究氯諾昔康PLGA微球的降解機(jī)制。
　　 結(jié)果表明,氯諾昔康PLGA微球體外釋放可達(dá)32天,釋藥曲線經(jīng)擬合符合Weibull模型。對常規(guī)釋放和加速釋放試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行點(diǎn)對點(diǎn)相關(guān)性擬合,二者相關(guān)性較好(r=0.9993),說明可用體外短期加速釋放實(shí)驗(yàn)預(yù)測常規(guī)釋放的數(shù)據(jù)。微球在體外釋放20天,微球表面孔道明顯增多,但微球形狀變化不明顯。體外釋放30天微球塌陷,外觀形

7、態(tài)發(fā)生徹底改變。說明氯諾昔康PLGA微球在釋放前期主要為擴(kuò)散機(jī)理,而后期主要為溶蝕機(jī)理。
　　 3氯諾昔康PLGA微球滅菌與穩(wěn)定性考察
　　 以滅菌后微球的外觀形態(tài)、藥物含量和加速釋放為指標(biāo),考察了10kGy和15kGy的60Co輻射滅菌對微球理化的影響,確定了合適的輻射滅菌強(qiáng)度。穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)以外觀形態(tài)和藥物含量為考察指標(biāo),通過影響因素試驗(yàn)、加速實(shí)驗(yàn)和長期實(shí)驗(yàn)考察微球的初步穩(wěn)定性。
　　 結(jié)果表明,10kGy和15

8、kGy60Co輻射滅菌對該微球制劑無明顯影響,滅菌后的微球微生物檢查合格。氯諾昔康PLGA微球在高溫、高濕條件下性質(zhì)均不穩(wěn)定,應(yīng)在低溫干燥的環(huán)境中保存。
　　 4氯諾昔康PLGA微球體內(nèi)生物相容性與藥效學(xué)研究
　　 以健康大鼠為模型動物,以生理鹽水為對照,關(guān)節(jié)腔注射空白PLGA微球和氯諾昔康PLGA微球,對不同時(shí)間點(diǎn)大鼠膝關(guān)節(jié)組織進(jìn)行病理切片觀察,評價(jià)空白微球和載藥微球?qū)植拷M織的損傷程度。以O(shè)A模型大鼠為實(shí)驗(yàn)動物,采用

9、關(guān)節(jié)腔分別注射氯諾昔康注射液(每周一次,1.2mg/0.1ml,連續(xù)給藥6周)和氯諾昔康PLGA微球混懸液(給藥一次,2.4mg/0.1ml)。給藥6周后處死大鼠,采用Mankin關(guān)節(jié)病組織學(xué)評分和造模前、造模后及給藥后不同時(shí)間膝關(guān)節(jié)的直徑和膝關(guān)節(jié)活動度為指標(biāo),比較氯諾昔康注射液與氯諾昔康PLGA微球?qū)οス顷P(guān)節(jié)炎的治療作用。
　　 結(jié)果顯示,關(guān)節(jié)腔注射氯諾昔康載藥微球1天后可見滑膜組織的炎性改變,關(guān)節(jié)軟骨未見明顯異常。3天后炎性

10、改變減輕,1周以后炎性改變基本恢復(fù),趨于正常?？瞻譖LGA微球與氯諾昔康載藥微球相比無明顯差別。結(jié)果說明氯諾昔康PLGA微球生物相容性良好,可用于關(guān)節(jié)腔注射給藥。對骨關(guān)節(jié)炎的治療作用,微球組與注射液組治療效果基本相同。此外,關(guān)節(jié)腔注射微球制劑給藥劑量小,對患者的創(chuàng)傷少,患者的順應(yīng)性好,易被患者接受。
　　 結(jié)論:本文制備的關(guān)節(jié)腔注射用氯諾昔康PLGA微球有效克服了常規(guī)注射劑治療時(shí)用藥頻繁、患者順應(yīng)性差等不足,氯諾昔康PLGA微球

11、延長了藥物作用時(shí)間,減少了給藥量并提高了病人用藥的順應(yīng)性,具有良好的社會價(jià)值和臨床應(yīng)用前景。
　　 本課題成功研制了氯諾昔康PLGA微球,采用冷凍干燥法制得了性質(zhì)穩(wěn)定的干燥微球。所采用的制備工藝簡便可行,重現(xiàn)性好,包封率較高,體外緩釋效果良好,釋藥曲線符合Weibull方程。本文建立了體外短期加速釋放試驗(yàn)法用以考察長效制劑的體外釋放情況,結(jié)果表明,加速釋藥方法可以很好的預(yù)測長效制劑的體外釋藥行為,且可縮短評價(jià)周期。采用10KGy

12、和15kGy60Co輻射滅菌后微球理化性質(zhì)無明顯改變,微生物限度檢查結(jié)果合格。生物相容性考察結(jié)果顯示氯諾昔康PLGA微球生物相容性良好,可用于關(guān)節(jié)腔注射給藥。藥效學(xué)考察結(jié)果說明,氯諾昔康PLGA微球可在降低給藥劑量的條件下達(dá)到與注射液相當(dāng)?shù)闹委熜Ч?br>　　 總之,本文采用長效緩釋微球?yàn)檩d體,創(chuàng)新性地改進(jìn)了非甾體抗炎藥氯諾昔康用于骨關(guān)節(jié)炎的治療；通過關(guān)節(jié)腔注射用氯諾昔康PLGA微球的制備、理化性質(zhì)研究、生物相容性和藥效學(xué)研究,豐富