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文檔簡(jiǎn)介
1、本文以自行分離的水產(chǎn)品源副溶血性弧菌為研究對(duì)象,通過(guò)超高壓處理分離得到的副溶血性弧菌D(V.parahaemolyticusD)和其經(jīng)超高壓馴化后的副溶血性弧菌NYD(V.parahaemolyticus NYD),測(cè)定兩株菌菌株細(xì)胞膜通透性、細(xì)胞膜Na+K+-ATP酶活性、細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)和細(xì)胞內(nèi)過(guò)氧化氫酶活性變化研究?jī)删暝趬毫ο录?xì)胞結(jié)構(gòu)和生物學(xué)特性的變化;菌液離心后上清液中核酸物質(zhì)和蛋白質(zhì)泄漏量測(cè)定、細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)可溶性活性蛋白含量和總巰
2、基含量測(cè)定以及胞內(nèi)蛋白聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)分析研究超高壓處理對(duì)菌株細(xì)胞活性蛋白質(zhì)圖譜的影響;超速離心法提取菌體外膜蛋白,經(jīng)SDS-PAGE分離后,質(zhì)譜法鑒定差異蛋白,并初步建立雙向電泳技術(shù)來(lái)進(jìn)一步分離所提取的外膜蛋白。研究結(jié)果具體如下:
從48份海產(chǎn)品中共檢出14株V.parahaemolyticus,檢出率為29.2%,14株V.parahaemolyticus溶血活性均為陰性,tlh基因均為陽(yáng)性,tdh和
3、trh基因均為陰性。
250 MPa,10 min的處理?xiàng)l件可以完全滅活V.parahaemolyticus D和NYD,通過(guò)掃描電鏡可以觀察到兩菌株細(xì)胞結(jié)構(gòu)嚴(yán)重變化。隨處理的壓力的升高,副溶血性弧菌菌株D與菌株NYD的細(xì)胞膜上Na+/K+-ATP酶活性明顯下降、細(xì)胞膜損傷率逐漸上升、菌株胞內(nèi)CAT酶活性先增加再逐漸降低。但在各個(gè)壓力處理?xiàng)l件下,菌株NYD的Na+/K+-ATP酶活都高于菌株D,說(shuō)明菌株NYD的壓力耐受性較強(qiáng)。
4、
250 MPa壓力處理10 min后,菌液離心上清液中核酸物質(zhì)和蛋白質(zhì)泄漏量達(dá)到最大。隨著處理壓力的增加,兩株菌胞內(nèi)分離得到的蛋白質(zhì)的蛋白含量和總巰基含量下降。SDS-PAGE分析結(jié)果表明超高壓處理對(duì)兩株菌胞內(nèi)蛋白分子量為140-180 kDa的條帶影響最大。超高壓處理可破壞副溶血性弧菌細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)造成蛋白變性從而導(dǎo)致細(xì)胞死亡。
SDS-PAGE電泳結(jié)合質(zhì)譜鑒定技術(shù),結(jié)果表明菌株NYD與D外膜蛋白差異蛋白鑒定為配體
5、門(mén)控通道蛋白(ligand-gated channel)和TonB依賴(lài)受體蛋白(TonB-dependent receptor),具有結(jié)合鐵離子、運(yùn)輸和受體活性。100,150 MPa壓力處理15 min后,兩菌株外膜蛋白圖譜中新表達(dá)的蛋白質(zhì)鑒定有外膜通道道白TolC(outer membranechannel protein Tol C)、檸檬酸合成酶(citrate(Si)-synthase)、鉀離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白TrkA(potassi
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