二氫楊梅素對副溶血性弧菌的抑菌機理探討.pdf

1、二氫楊梅素(DMY)是一種多酚羥基雙氫黃酮醇，大量存在于葡萄科蛇葡萄屬植物藤茶中，具有抗炎止痛及抗過敏、止咳祛痰、保肝護肝、降血糖、降血脂及抗脂質(zhì)過氧化作用、抗菌、抗癌等生理活性。DMY作為一種具有廣譜抗菌效果的黃酮類化合物，對桿菌或弧菌屬具有很強的抑制作用。本課題通過DMY對幾種常見的的食品致病菌進行抑菌實驗研究，確定DMY的最低抑菌濃度，并以副溶血性弧菌主要對象、探討DMY對其的抑菌特性并借助計算機輔助藥物篩選靶點的sybyl軟件進

2、行作用的靶點分析，并對南美白對蝦中的副溶血性弧菌進行抑制研究，從而為開發(fā)一種強有力的水產(chǎn)品抗菌劑提供理論依據(jù)。其內(nèi)容如下:
　　(1) DMY對革蘭氏陽性菌及陰性菌都有較好的抑菌效果，但對霉菌沒有顯示出抑菌作用，DMY協(xié)同檸檬酸對副溶血性弧菌有較好的抑菌效果，DMY濃度為5g/L下，對TSB培養(yǎng)基中的副溶血性弧菌有明顯的抑菌效果，添加1％的檸檬酸對副溶血性弧菌的抑菌效果最好;最低抑菌濃度僅為0.625g/L，5g/L的DMY協(xié)同檸

3、檬酸的抑菌效果比同濃度的山梨酸鉀好。其主要通過抑制副溶血性弧菌的對數(shù)生長期的生長而達(dá)到抑制作用。5g/L的DMY協(xié)同檸檬酸對南美白對蝦里的副溶血性弧菌的抑制作用沒有達(dá)到完全抑制的效果，這很可能與DMY對副溶血性弧菌里的脯氨酸代謝途徑有關(guān)，DMY具有多種生物活性，對人體前列腺癌細(xì)胞DU145有很強的抑制繁殖效果，但協(xié)同有機酸后幾乎沒有增加抗癌作用。
　　(2)掃描電鏡下觀察DMY作用后的副溶血性弧菌，其形態(tài)與對照組相比有明顯的改變。

4、空白對照組副溶血性弧菌呈現(xiàn)弧狀、棒狀表面光滑、外觀圓潤、飽滿;經(jīng)DMY處理24 h后，大部分菌體嚴(yán)重皺縮、干癟、扭曲變形，有明顯的凹陷或不規(guī)則的突起結(jié)構(gòu)。電導(dǎo)率系數(shù)結(jié)果表明，經(jīng)DMY處理24 h后1.5MIC組及10MIC組電導(dǎo)率系數(shù)均呈現(xiàn)上升，10MIC組急劇上升，說明低濃度的DMY作用于副溶血性弧菌一定時間后細(xì)胞膜通透性增加，使DMY分子滲透進入質(zhì)膜而作用于其他物質(zhì)，導(dǎo)致膜的完整性遭到破壞，細(xì)胞內(nèi)離子外泄。
　　抑菌物質(zhì)濃度加

5、大后，膜的通透性進一步增加，抑菌物質(zhì)更容易進入質(zhì)膜，作用于大分子物質(zhì)后細(xì)胞膜開始潰爛，內(nèi)容物質(zhì)完全滲透出來，導(dǎo)致電導(dǎo)系數(shù)急劇升高。細(xì)胞損傷檢測實驗結(jié)果也證實1.5MIC組對副溶血性弧菌短時間內(nèi)難以達(dá)到完全殺滅微生物的作用，短時間內(nèi)只是造成了部分細(xì)胞損傷或壞死。當(dāng)加大DMY(10MIC)的濃度后，在較短時間內(nèi)即可達(dá)到很好的損傷或致使壞死細(xì)胞的效果，細(xì)胞的壞死比例高達(dá)80％以上。
　　(3)進一步探討DMY作用下副溶血性弧菌菌體細(xì)胞表

6、面疏水性與殺菌率的關(guān)系時發(fā)現(xiàn)，DMY的殺菌率有賴于微生物細(xì)胞表面疏水性;一定范圍內(nèi)表面疏水性系數(shù)越高，呈現(xiàn)出來的抑菌效果越好;這可能由于疏水性極強的DMY作用于細(xì)胞膜表面后，引起微生物細(xì)胞膜表面疏水性的增加，從而增加了DMY滲透進入細(xì)胞膜的可能性。通過測定脯氨酸含量、ProDH、γ-谷氨酰激酶的活性可知，DMY協(xié)同檸檬酸作用于副溶血性弧菌時導(dǎo)致脯氨酸含量在短時間內(nèi)積累，而分子對接的結(jié)果進一步表明DMY分子以離子形式進入質(zhì)膜后的作用靶點為