山莨菪堿對急性心肌梗死缺血-再灌注損傷的防治效應(yīng)及其對心肌細(xì)胞凋亡影響的機(jī)制研究.pdf

1、本研究以前期研究為基礎(chǔ)，著重探討預(yù)防性應(yīng)用山莨菪堿對急性心肌梗死后缺血/再灌注損傷的防治作用。本系列研究共分為五個部分:
　　第一部分 預(yù)防性冠脈內(nèi)應(yīng)用山莨菪堿對急性ST段抬高心肌梗死直接PCI術(shù)后心肌灌注的保護(hù)效應(yīng)
　　目的:觀察急性ST段抬高心肌梗死(STEMI)行直接經(jīng)皮冠狀動脈介入治療(pPCI)中，在梗死相關(guān)動脈(IRA)預(yù)防性冠脈內(nèi)應(yīng)用山莨菪堿，對患者心肌再灌注及心功能的影響。
　　方法:入選2012年10

2、月至2014年2月收入河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院心內(nèi)科的發(fā)病12h內(nèi)行直接PCI治療的ST段抬高型心肌梗死患者納入本研究。將入選患者隨機(jī)分為山莨菪堿組（ANI group），IRA開通前預(yù)防性冠脈內(nèi)給予山莨菪堿2000μg/10 ml;對照組(CON group)冠脈內(nèi)給予等容積生理鹽水。所有患者均經(jīng)前臂動脈入徑行冠狀動脈造影(CAG)檢查及PCI介入治療。由兩名以上經(jīng)驗豐富的心臟病專家進(jìn)行量化的冠脈造影灌注指標(biāo)判定，包括初始及術(shù)后TIMI血

3、流，TIMI心肌灌注分級(TMPG)，校正的TIMI血流計幀(CTFC)。術(shù)前及術(shù)后每6小時檢查心肌壞死標(biāo)記物，以峰值CK-MB間接評估患者心肌梗死面積。術(shù)前及術(shù)后90 min記錄患者心電圖，以ST段回落(STR)評價術(shù)后心肌再灌注水平，計算兩組完全STR(術(shù)后90min時心電圖ST段抬高之和較入院時下降≥70％)比例。隨訪觀察兩組患者3個月主要不良心血管事件(MACEs)發(fā)生的差異。使用SPSS16.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計，以P值＜0.0

4、5認(rèn)為有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)果:共計入選患者118例，其中ANI組58例，CON組60例。兩組患者在術(shù)前血栓積分分布以及基線TIMI血流分級無顯著差異，但PCI術(shù)后ANI組TIMI3及TMPG3比例顯著高于CON組(TIMI血流3級:91％ vs.75％，P=0.039; TMPG3級:84％ vs.65％，P=0.044)。ANI與CON兩組患者入院時基線CK-MB水平無統(tǒng)計學(xué)差異，但冠脈內(nèi)給予山莨菪堿后，患者術(shù)后CK-MB峰值

5、顯著降低，曲線下面積(AUC)較CON組減少24.18％，有統(tǒng)計學(xué)意義。兩組患者入院基線LVEF無統(tǒng)計學(xué)差異，而術(shù)后7天時，ANI組LVEF為57.22±8.19％， CON組LVEF為53.17±6.18％，兩組統(tǒng)計學(xué)差異顯著(P=0.003)。術(shù)后30天時，ANI組LVEF為62.52±8.27％，CON組LVEF為59.12±9.31％，有統(tǒng)計學(xué)差異(P=0.038)。隨訪3個月結(jié)果顯示，ANI組共2例患者M(jìn)ACEs事件，而CON

6、組共計5例，兩組均無死亡患者，且兩組間比較無顯著統(tǒng)計學(xué)差異(P=0.433)。
　　結(jié)論:預(yù)防性冠脈內(nèi)應(yīng)用山莨菪堿可顯著改善STEMI患者pPCI術(shù)后心肌灌注水平，減少心肌梗死面積，改善患者預(yù)后。
　　第二部分 預(yù)防性應(yīng)用山莨菪堿對大鼠心肌缺血/再灌注損傷后心肌保護(hù)作用及凋亡影響的研究
　　目的:觀察預(yù)防性應(yīng)用山莨菪堿對心肌缺血/再灌注大鼠的心肌保護(hù)作用及心肌細(xì)胞凋亡的影響。
　　方法:將54只Sprague-D

7、awley(SD)大鼠隨機(jī)分為三組，分別為假手術(shù)(SO)組，缺血/再灌注(I/R)組，缺血/再灌注山莨菪堿(ANI)組。SO組僅在大鼠心臟前降支起點2-3 mm處穿線不結(jié)扎;I/R組結(jié)扎大鼠心臟前降支40min后，松解結(jié)扎線再灌注3 h;ANI組再灌注前靜脈給予山莨菪堿。所有大鼠再灌注結(jié)束后，使用TTC（2，3，5—氯化三苯基四氮唑）染色計算大鼠心肌梗死面積，取靜脈血檢測心肌壞死標(biāo)志物L(fēng)DH，CK-MB含量，測量梗死后心肌ATP、MDA

8、及SOD濃度，并使用透射電鏡觀察心肌超微結(jié)構(gòu)改變。使用Westem-blot分析法觀察梗死心肌凋亡相關(guān)因子caspase-3，caspase-8及caspase-9的蛋白表達(dá)。
　　結(jié)論:預(yù)防性應(yīng)用山莨菪堿可顯著減少缺血/再灌注大鼠心肌梗死面積，減輕心肌超微結(jié)構(gòu)損傷，降低心肌損傷標(biāo)志物水平，增加心肌梗死后ATP能源供給，并可顯著減少caspase-3，caspase-8凋亡因子蛋白表達(dá)，減少大鼠急性心肌梗死后細(xì)胞凋亡。
　　

9、第三部分 預(yù)防性應(yīng)用山莨菪堿對H9c2心肌細(xì)胞缺氧/復(fù)氧后凋亡的影響及其機(jī)制研究
　　目的:探討使用山莨菪堿預(yù)處理缺氧/復(fù)氧大鼠H9c2心肌細(xì)胞時，山莨菪堿對其凋亡的影響及相關(guān)機(jī)制。
　　方法:H9c2心肌細(xì)胞接種于25cm2培養(yǎng)瓶中，待長滿至融合度約90％時，隨機(jī)分為三組，分別為對照(CON)組:心肌細(xì)胞正常培養(yǎng);缺氧/復(fù)氧(H/R)組，心肌細(xì)胞缺氧培養(yǎng)3小時后，正常培養(yǎng)基復(fù)氧培養(yǎng)12小時;山莨菪堿(ANI)組:缺氧培養(yǎng)3

10、小時后，換入含山莨菪堿的培養(yǎng)基復(fù)氧培養(yǎng)12小時。使用磺酰羅丹明B比色法（SRB）檢測心肌細(xì)胞活性，原位末端標(biāo)記法(TUNEL)染色觀察細(xì)胞凋亡，瓊脂糖凝膠電泳檢測凋亡后DNA片段斷裂情況。磷脂肽結(jié)合蛋白Ⅴ(AnnexinⅤ)聯(lián)合碘化丙啶(PI)雙染法和流式細(xì)胞學(xué)技術(shù)分析各組H9c2心肌細(xì)胞缺氧/復(fù)氧后凋亡變化。提取細(xì)胞總蛋白，使用BCA法測定細(xì)胞蛋白質(zhì)濃度，使用Western-blot法測定細(xì)胞凋亡蛋白caspase-3，caspase

11、-8，Bcl-2及Bax的蛋白表達(dá)水平，并使用實時定量聚合酶鏈反應(yīng)(qRT-PCR)測定相關(guān)caspase-3，caspase-8，Bcl-2及Bax的mRNA水平。
　　結(jié)論:山莨菪堿預(yù)處理可明顯減少H9c2心肌細(xì)胞H/R損傷后的細(xì)胞凋亡，其機(jī)制可能通過下調(diào)caspase-3，caspase-8及Bax的蛋白和mRNA水平，上調(diào)Bcl-2蛋白及mRNA表達(dá)水平來實現(xiàn)。
　　第四部分 預(yù)防性應(yīng)用山莨菪堿聯(lián)合rhBNP對ST段

12、抬高心肌梗死患者早期PCI心肌灌注改善作用的研究
　　目的:探討在急性ST段抬高心肌梗死(STEMI)合并心力衰竭患者行直接經(jīng)皮冠狀動脈介入治療(pPCI)中，預(yù)防性聯(lián)合應(yīng)用山莨菪堿及rhBNP對患者心肌再灌注及心功能的作用。
　　方法:入選2014年2月至2015年2月收入河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院心內(nèi)科的發(fā)病12h內(nèi)行直接PCI治療的ST段抬高型心肌梗死患者共計96例納入本研究。將入選患者隨機(jī)分為對照組（單純PCI組）、山莨菪

13、堿組（ANI組）組、重組人腦利鈉肽組（rhBNP組）和山莨菪堿聯(lián)合重組人腦利鈉肽組（ANI+rhBNP組）。山莨菪堿給藥方式為:IRA開通前預(yù)防性冠脈內(nèi)給予山莨菪堿2000μg/10ml; rhBNP給藥方式為術(shù)前及靜脈給予1.5μg/kg負(fù)荷量，以0.0075μg/kg/min低劑量維持靜脈泵點至術(shù)后72h。所有患者均經(jīng)前臂動脈入徑行冠狀動脈造影(CAG)檢查及PCI介入治療。由兩名以上經(jīng)驗豐富的心臟病專家進(jìn)行量化的冠脈造影灌注指標(biāo)判

14、定，包括初始及術(shù)后TIMI血流，TIMI心肌灌注分級(TMPG)，校正的TIMI血流計幀(CTFC)。術(shù)前及術(shù)后每6小時檢查心肌壞死標(biāo)記物，以峰值CK-MB間接評估患者心肌梗死面積。術(shù)前及術(shù)后90 min記錄患者心電圖，以ST段回落(STR)評價術(shù)后心肌再灌注水平，計算兩組完全STR（術(shù)后90min時心電圖ST段抬高之和較入院時下降≥70％）比例。使用SPSS16.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計，以P值＜0.05認(rèn)為有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)論:

15、PCI前預(yù)防性應(yīng)用山莨菪堿及rhBNP均可改善冠脈微循環(huán)及心肌灌注;山莨菪堿和rhBNP在減少心肌梗死面積方面可能存在協(xié)同作用。
　　第五部分 重組人腦利鈉肽在接受急診PCI治療的急性心肌梗死心力衰竭伴輕度腎功能不全患者中應(yīng)用腎功能的安全性研究
　　目的:探討重組人腦利鈉肽對急性ST段抬高心肌梗死心力衰竭（STEMI-HF）伴輕度腎功能不全患者急診經(jīng)皮冠狀動脈介入治療(pPCI)后的腎功能的影響。
　　方法:連續(xù)入選于

16、河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院心內(nèi)五科行急診PCI的急性ST抬高心肌梗死心力衰竭伴輕度腎功能不全患者。術(shù)前隨機(jī)應(yīng)用重組人腦利鈉肽(rhBNP group)或硝酸甘油(NIT group)，觀察PCI術(shù)前及術(shù)后患者血清肌酐(SCr)、估測腎小球濾過率(eGFR)、胱抑素-C(Cys-C)，β2微球蛋白水平變化以及計算術(shù)后72小時內(nèi)患者CIN的發(fā)生率。CIN定義為接觸對比劑的72小時內(nèi)，血清肌酐絕對值升高≥44.2μmol/L或與基礎(chǔ)值相比升高≥25