鹽地堿蓬SsPrx Q基因的克隆與功能鑒定.pdf

1、許多代謝反應(yīng)像光合作用、光呼吸以及呼吸作用都可以產(chǎn)生活性氧,尤其是在極端的環(huán)境中.活性氧不可避免的對(duì)生物大分子如脂質(zhì)、蛋白質(zhì)以及DNA等造成氧化損傷,但也可以作為信號(hào)分子調(diào)節(jié)基因的表達(dá)和酶活性并參與防御反應(yīng).因此活性氧必須被控制在適當(dāng)?shù)乃揭跃S持正常的細(xì)胞代謝.生活在有氧條件下的生物形成了一系列抗氧化系統(tǒng)來(lái)保護(hù)細(xì)胞免受氧化損傷.一種被稱作過(guò)氧還蛋白(Prx)的不含血紅素輔基的過(guò)氧化物酶家族最近引起人們的注意,它廣泛存在于所有的生物中,可

2、以利用硫氧還蛋白(Trx)、谷氧還蛋白(Grx)以及cyclophilinA等作為電子供體還原H<,2>O<,2>以及各種烷基過(guò)氧化物,生成水和相應(yīng)的醇.大量的研究表明Prxs在光合,韌皮部代謝和環(huán)境脅迫中具有重要作用.植物中的過(guò)氧還蛋白共分為四類:1-Cys Prx、2-Cys Prx、TypeⅡ Prx以及Prx Q.其中Prx Q首先從佛甲草(Sedum linear)中被克隆,與細(xì)菌鐵蛋白共遷移蛋白(BCP)同源性很高.目前對(duì)P

3、rx Q的許多研究主要集中在生化功能方面,而對(duì)它的生理功能、表達(dá)特點(diǎn)研究較少.為了進(jìn)一步對(duì)Prx Q進(jìn)行酶活分析,用PreScission Protease酶切GST融合蛋白,得到大約24 KDa的蛋白.它可以保護(hù)質(zhì)粒免受自由基的破壞,并具有硫氧還蛋白依賴的過(guò)氧化物酶活性,硫氧還蛋白可以作為它的電子供體.利用花浸染法將農(nóng)桿菌攜帶的雙元表達(dá)載體pROKⅡ+SsPrx Q轉(zhuǎn)入擬南芥,通過(guò)多次篩選已經(jīng)獲得了轉(zhuǎn)基因擬南芥的純合植株.PCR和So