配對盒基因2(PAX2)對食管癌細胞生物學功能的影響及機制研究.pdf

1、第一部分、食管鱗癌組織中PAX2因子的表達及其臨床意義
　　目的：研究配對基因盒2（PAX2）在食管鱗癌(ESCC)組織、癌旁組織及正常食管上皮組織中的表達。
　　方法：通過免疫組織化學熒光染色方法檢測15例正常食管組織、52例食管鱗癌癌旁組織和120例食管鱗癌組織中PAX2的蛋白表達水平，并觀察其與食管鱗癌患者年齡、性別、腫瘤分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期及淋巴管浸潤的關系。
　　結(jié)果：在人食管鱗癌組織中PAX2蛋

2、白表達水平顯著高于對應癌旁組織及正常食管組織（P=0.003和P=0.002）。PAX2蛋白表達水平與TNM分期相關（P=0.001），PAX2表達水平在37例TNM III和IV期患者中明顯高于67例I和II期患者，差異有統(tǒng)計學意義（1.353±0.088和1.933±0.133，P<0.0001）；同樣，PAX2的表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（P=0.019）和淋巴管浸潤（P=0.005）相關，差異有統(tǒng)計學意義。而PAX2的表達與患者年齡、性別

3、、生物學分級無明顯相關性。
　　結(jié)論：PAX2在食管鱗癌組織中的表達明顯高于對應癌旁組織及正常食管組織，且與TNM分期、淋巴結(jié)或轉(zhuǎn)移及淋巴管浸潤具有顯著相關性。
　　第二部分、PAX2在食管癌中的生物學功能研究
　　目的：研究配對基因盒2（PAX2）在食管鱗癌細胞株TE-1和Eca-109細胞中的生物學功能。
　　方法：構(gòu)建 PAX2過表達載體并驗證上述載體和靶向PAX2的siRNA。通過MTT與克隆形成實驗檢測

4、PAX2對食管癌細胞生長增殖的影響；通過Transwell小室模型檢測PAX2對食管癌細胞侵襲能力的影響；通過克隆形成實驗檢測PAX2對放射敏感性的影響；通過Western blot檢測相關蛋白MMP-2、MMP-9的表達。
　　結(jié)果：食管癌TE-1和Eca-109細胞轉(zhuǎn)染PAX2過表達載體后，細胞中PAX2蛋白水平明顯提高；細胞轉(zhuǎn)染靶向PAX2的siRNA后，PAX2的水平顯著低于對照組。細胞存活實驗表明：PAX2過表達會抑制細

5、胞的生長及克隆形成；而敲低PAX2的表達則能加速細胞的生長與克隆形成。Transwell實驗表明，PAX2過表達促進食管癌細胞的侵襲，敲低PAX2水平則抑制細胞的侵襲。PAX2過表達能誘導MMP2和MMP9的表達水平。抑制PAX2的表達可提高食管癌細胞的放射敏感性。
　　結(jié)論：PAX2具有抑制食管癌增殖、促進食管癌侵襲及放射抗拒性的功能。
　　第三部分、PAX2在食管癌中的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機制研究
　　目的：研究配對基因盒2（

6、PAX2）在食管癌細胞株中的調(diào)控網(wǎng)絡及下游靶基因，全面揭示PAX2的調(diào)控網(wǎng)絡。
　　方法：TE-1細胞過表達PAX2后采用表達譜芯片檢測與轉(zhuǎn)染對照載體的細胞mRNA表達譜的變化?？寺〔煌L度的白介素5（IL-5）基因的啟動子到pGL3-Basic報告基因載體上。采用熒光素酶實驗檢測PAX2對IL-5啟動子轉(zhuǎn)錄活性的影響。采用RT-PCR檢測PAX2對內(nèi)源性IL-5的轉(zhuǎn)錄激活作用。采用染色質(zhì)免疫共沉淀（ChIP）檢測PAX2與IL-

7、5啟動子DNA的直接結(jié)合。在組織樣品中檢測PAX2與IL-5 mRNA的相關性。
　　結(jié)果：食管癌TE-1細胞轉(zhuǎn)染PAX2過表達載體后有數(shù)百個基因的表達發(fā)生明顯變化（變化倍數(shù)大于等于2倍）。生物信息學表明，上調(diào)變化倍數(shù)較大IL-5基因的啟動子上游-110到-1100bp處存在兩個PAX2結(jié)合位點，提示PAX2可能直接調(diào)控IL-5的表達。熒光素酶報告基因?qū)嶒灡砻鱅L-5啟動子缺失PAX2的結(jié)合位點后熒光素酶活性顯著下降；PAX2過表