下丘腦LHA-ARC Orexin-A通路對(duì)胃牽張敏感神經(jīng)元放電活動(dòng)和胃運(yùn)動(dòng)調(diào)控研究.pdf

1、目的：食欲素（orexin）是一種多功能神經(jīng)肽，主要分布于下丘腦，其在能量穩(wěn)態(tài)、獎(jiǎng)勵(lì)、成癮和睡眠/覺(jué)醒等生理功能中發(fā)揮重要作用，也被視為調(diào)節(jié)攝食行為的一個(gè)重要的調(diào)質(zhì)。本文擬通過(guò)逆行追蹤結(jié)合熒光免疫組化方法，觀察大鼠下丘腦外側(cè)核（lateral hypothalamic area，LHA）-弓狀核（Arcuate nucleus，ARC）orexin神經(jīng)和功能通路構(gòu)成，通過(guò)神經(jīng)元細(xì)胞外放電記錄和在體胃運(yùn)動(dòng)，探討LHA-ARC orexin

2、-A通路對(duì)胃?jìng)魅胄畔⒁约拔高\(yùn)動(dòng)的調(diào)控及機(jī)制。
　　方法：本研究采用成年雄性Wistar大鼠，通過(guò)①采用熒光金（FG）逆行追蹤結(jié)合熒光免疫組化方法，觀察LHA-ARC orexin-A神經(jīng)通路的構(gòu)成。②采用細(xì)胞外放電記錄方法，鑒定ARC orexin胃牽張敏感神經(jīng)元（Gastric distention sensitive neurons，GD），并探討ARC內(nèi)orexin-A對(duì)GD神經(jīng)元放電活動(dòng)的影響及機(jī)制；采用電刺激LHA，觀察

3、ARC內(nèi)orexin-A敏感的GD神經(jīng)元放電活動(dòng)改變，探討orexin-A在LHA-ARC通路中調(diào)控作用。③ARC微量注射orexin-A和及其受體阻斷劑SB334867，以及電刺激LHA，觀察大鼠胃收縮幅度和頻率的改變。
　　結(jié)果：
　?、贌晒饨穑‵G）逆行追蹤結(jié)合熒光免疫組化實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，ARC微量注射FG后1周，大鼠經(jīng)心灌注固定、腦冰凍切片，以及orexin-A免疫組化染色，在LHA可見(jiàn)FG/orexin雙重標(biāo)記的神經(jīng)

4、元，提示，LHA中orexin-A神經(jīng)元可發(fā)出纖維投射至ARC。
　　②大鼠ARC共記錄到149個(gè)GD神經(jīng)元，其中GD-E神經(jīng)元91個(gè)，GD-I神經(jīng)元58個(gè)。ARC微量注射orexin-A，62個(gè)（62/91，68.1％）GD-E神經(jīng)元興奮性顯著增加，其放電頻率由4.27±0.58 Hz增加到8.46±0.95Hz（P<0.01）；39個(gè)（39/58，67.2%）GD-I神經(jīng)元興奮性也顯著增強(qiáng)，其放電頻率由4.02±0.53Hz增

5、加到5.43±0.57Hz（P<0.05）。然而，ARC給予大鼠orexin-A受體拮抗劑SB334867，再給予orexin-A，orexin-A興奮效應(yīng)完全被阻斷（P>0.05）。
　　③電刺激LHA，在ARC檢測(cè)到的62個(gè)orexin-A敏感GD-E神經(jīng)元中，有43個(gè)（43/62，69.4%）放電頻率由4.08±0.55Hz升高至9.04±1.03Hz，興奮顯著增強(qiáng)（P<0.01）；有11個(gè)（11/62，17.7%）放電活動(dòng)

6、被抑制（2.01±0.43Hz，P<0.05），剩余8個(gè)（8/62，12.9%）神經(jīng)元放電活動(dòng)則無(wú)明顯變化（3.97±0.58Hz，P>0.05）。在記錄到的39個(gè)orexin-A敏感GD-I神經(jīng)元中，26個(gè)（26/39，66.7%）也出現(xiàn)興奮反應(yīng)，放電頻率從3.87±0.51Hz升高8.13±0.94Hz（P<0.05），有8個(gè)（8/39，20.5%）神經(jīng)元被抑制（1.95±0.37Hz，P<0.05），5個(gè)（5/39，12.8%）神

7、經(jīng)元沒(méi)有變化（4.01±0.49Hz，P>0.05）。然而ARC預(yù)先注射orexin-A受體拮抗劑SB334867，可減弱LHA電刺激對(duì)ARC orexin-A敏感的GD神經(jīng)元的興奮效應(yīng)（4.23±0.53Hz，P<0.05）。
　?、芪高\(yùn)動(dòng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：在ARC注射不同濃度orexin-A，大約5min后，大鼠胃收縮幅度和頻率呈劑量依賴性增加（P<0.05～0.01）。ARC注射SB334867，可完全消除orexin-A對(duì)大鼠