人退變椎間盤(pán)內(nèi)三種干細(xì)胞的生物學(xué)特性比較.pdf

1、目的：比較來(lái)源于同一人退變椎間盤(pán)內(nèi)髓核干細(xì)胞(NPSCs)、纖維環(huán)干細(xì)胞(AFSCs)及軟骨終板干細(xì)胞(CESCs)的生物學(xué)特性。
　　方法：收集7例經(jīng)X線(xiàn)、MRI（核磁共振）確診為椎間盤(pán)突出癥患者，將取出的椎間盤(pán)仔細(xì)分離并進(jìn)行酶消化、濾網(wǎng)過(guò)濾后獲得NPSCs、AFSCs及CESCs。培養(yǎng)至第3代時(shí)，采用CCK-8（細(xì)胞增殖與活性檢測(cè)試劑盒）檢測(cè)三種干細(xì)胞的生長(zhǎng)活性，并進(jìn)行成脂、成骨及成軟骨誘導(dǎo)分化。誘導(dǎo)21d后分別應(yīng)用油紅O染色

2、檢測(cè)細(xì)胞成脂能力，茜素紅染色檢測(cè)細(xì)胞成骨能力，甲苯胺藍(lán)染色檢測(cè)細(xì)胞成軟骨能力。提取第3代細(xì)胞總RNA，分別行RT-PCR（實(shí)時(shí)定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)）檢測(cè)成脂、成骨及成軟骨相關(guān)基因的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：來(lái)自于同一患者的NPSCs、AFSCs與CESCs形態(tài)上相似，無(wú)明顯差異。生長(zhǎng)曲線(xiàn)顯示CESCs（第1、3、5、7、9、11、13、15天OD值分別為0.35±0.01，0.52±0.02，0.64±0.08，0.80±0.19

3、，0.79±0.2，1.06±0.11，1.37±0.09,1.31±0.41）與AFSCs（第1、3、5、7、9、11、13、15天OD值分別為0.38±0.01，0.50±0.03，0.72±0.06，0.82±0.13，0.87±0.08，0.87±0.09，1.20±0.05,1.43±0.05）增殖能力要比NPSCs（第1、3、5、7、9、11、13、15天OD值分別為0.32±0.02，0.42±0.04，0.59±0.01

4、，0.64±0.17，0.65±0.19，0.68±0.21，0.67±0.12,0.59±0.12）活躍。油紅O染色、茜素紅染色及甲苯胺藍(lán)染色分別證實(shí)三種干細(xì)胞均可向脂、骨及軟骨三系誘導(dǎo)分化。RT-PCR檢測(cè)顯示AFSCs在成脂(PPARγ基因相對(duì)表達(dá)量6.85±0.32，LPL基因相對(duì)表達(dá)量13.72±0.37)、及成軟骨(COII基因相對(duì)表達(dá)量10.45±1.10，SOX-9基因相對(duì)表達(dá)量14.39±1.22)基因表達(dá)方面比NPS

5、Cs（PPARγ基因相對(duì)表達(dá)量6.63±0.50，LPL基因相對(duì)表達(dá)量8.41±0.42；COII基因相對(duì)表達(dá)量3.53±0.62，SOX-9基因相對(duì)表達(dá)量7.66±0.68）與CESCs（PPARγ基因相對(duì)表達(dá)量7.21±0.21，LPL基因相對(duì)表達(dá)量10.62±0.37；COII基因相對(duì)表達(dá)量8.26±0.49，SOX-9基因相對(duì)表達(dá)量13.70±1.10）略強(qiáng)；而成骨能力方面，CESCs最強(qiáng)（RUNX-2基因相對(duì)表達(dá)量7.30±1

6、.1，COI基因相對(duì)表達(dá)量8.22±0.84），AFSCs（RUNX-2基因相對(duì)表達(dá)量6.20±0.92,COI基因相對(duì)表達(dá)量4.94±0.90）與NPSCs相當(dāng)（RUNX-2基因相對(duì)表達(dá)量2.61±0.06，COI基因相對(duì)表達(dá)量7.05±0.82；）；NPSCs的成脂基因尤其脂蛋白脂肪酶(LPL)基因表達(dá)較低。
　　結(jié)論：NPSCs、AFSCs及CESCs在體外培養(yǎng)中細(xì)胞形態(tài)相似，但生物學(xué)特性方面存在著差異。體外誘導(dǎo)分化及RT-